文档介绍：委员答辩日期:.
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胩帧彩茅┳秩掌冢导师签名:方形够雾久甓氏日签字日期:训‘‘年T浙江大学研究生学位论文独创性声明学位论文版权使用授权书年厂月多或撰写过的研究成果,也不包含为获得浙望太堂或其他教育机构的学位或证书本学位论文作者完全了解浙江太堂送交本论文的复印件和磁盘,允许论文被查阅和借阅。本人授权浙江太堂可以缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。除了文中特别加以标注和致谢的地方外,论文中不包含其他人已经发表而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名:有权保留并向国家有关部门或机构将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索和传播,可以采用影印、C艿难宦畚脑诮饷芎笫视帽臼谌ㄊ签字日期:’,
致谢在三年半的博士研究生学习即将结束之际,我要感谢所有指导、帮助和关心卫群老师,感谢他们对我实验工作的大力支持和指导帮助。华、王祝军、陈园园等,感谢研究生办公室的各位研究生同学徐学峰、吴蔚、余最后感谢我的家人三年半来对我的默默支持我的老师和同学。感谢我的导师汤永民教授在学习、科研、工作和生活上的关心和帮助,从选题、实验设计直到论文的撰写,无不倾注了他的心血和汗水。他严肃的科学态度、严谨的治学精神、精益求精的工作作风,深深地感染和激励着我,使我受益终生,在此向汤老师致以诚挚的谢意和崇高的敬意。感谢医院血液科实验的钱柏琴,沈红强、赵宁、陈萍老师等,感谢血液科徐感谢在读期间血液科的各位研究生兄弟姐妹,李思思、廖婵、郭晓萍、冯建金丹、许燕萍、江佩芳等,感谢他们在学习及实验中给予的帮助和关心,让我渡过了一段快乐而充实的博士生生活。感谢医院各位领导和所有关心我的同事和朋友。沈笛颖年浙江大学博士学位论文
入鼠嵌合型抗人抗体的研制及功能研究浙江大学医学院博士研究生导师中文摘要儿科学沈笛颖汤永民教授单克隆抗体タ特异性高,因此已经广泛用于疾病的诊断和治疗,但是目前研制的单抗多为鼠源性的,在治疗中反复使用,作为异源蛋白在人体内可诱发产生人抗鼠免疫球蛋白抗体,大大限制了它的临床应用。只有将其进行人源化的改造,才能有效应用于临床治疗。人鼠嵌合型抗体是指通过基因工程的技术和方法,将鼠源性单抗的可交区与人抗体恒定区拼接形成的抗体。目前较为成熟的做法就是将鼠单抗的可变区构建成单链抗体与人的段结合,相对于其它人源化抗体具有以下优点:技术路线简单,易于操作;鼠源抗体的亲和力和特异性得到了很好的保留;抗体的完整性好,在体内的潴留时间长。分子是馨拖赴砻娣⒒犹匾煨孕藕抛5嫉氖芴澹嬖谟贐细胞成熟的各个阶段,在大多数的非霍奇金淋巴瘤托矶喟籽2“ḿ毙粤馨细胞白血病吐粤馨拖赴籽2细胞上高表达,目前已成为免疫治疗的一个重要靶点。目前针对刀裥灾琢龅闹瘟疲丫幸恍〤匾性抗体治疗,包括非结合抗体,,在体外实验、动物模型、以及早期的临床实验中取得了较为理想的结果。但是还远没能满足临床应用的需要,技术上也还存在不少问题,因此有必要研究更多的抗体。—简称,是本院自行研制的鼠源性抗单抗,本课题在前期研究的基础上,对此单抗进行进一步的基因工程改造,构建可以表达人鼠嵌合型固的真核表达载体,转染至赴斜泶铮觳釮浙江大学博士学位论文.
真核表达载体腃一荅的构建。幽亲和层析法纯化嵌合抗体位珺法测定抗方法:抽提赴鸌矾⒁源宋D0澹ü’.螩椒ɡ┰龀单抗轻的生物学活性,为该抗体免疫毒素的研制和临床应用以及进一步人源化改造打下基础。⒅亓葱藕烹暮涂杀淝蚩寺『托蛄蟹治觥链和重链的可变区片段,建立克隆,送测序。将测序结果与崃春椭亓吹囊阎P蛄薪斜榷裕⑼ü齋隺甇信号肽预测服务软件对崃春椭亓吹男藕烹慕性げ狻以狵载体为模板,设计引物┰龀鯢危寺。序正确后,,构建载体。通过重叠延伸姆椒ɡ┰龀鰏片段,建立克隆,送测序,连入载体,,,转染后小时加压筛选。加压筛选天左右,,细胞免疫荧光,流式细胞仪分析法检测阳性克隆。对阳性克隆进行单克隆化,流式细胞仪分析法筛选出高效稳定表达细胞株,命名为瓾收集上清,体浓度。,并确定分子量大小。中文摘要浙江大学博士学位论文.
上清中还存在①賏大小的多聚体。笛榉⑾諬能够靶结论:。对阳性细胞进行单克隆化,流式分析法筛选出高效稳定表达株瓾孟赴闓压培养芎笱粜韵赴纱ヒ陨稀缀筒阄龇ù炕疕抗体,ú馀ǘ扰ㄋ醮炕固逦/,瓾赴嘌锨迮ǘ约为坝