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一第一军医大学学报年卷第期
成人静脉内皮细胞单次传代大规模体外培养
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、’璩扛医院警外辩血管外辩研究室。‘谊验科
,.摄羹用腔原酶消化成八静眯总敌士.×。×十细胞:..×
】,十细囊/:的接神密度将萁接仲尹—,士,以比
。
—和分量相差无统计学意义.
美■调静辣成人内皮Ⅲ咆体外墙舞
将培养的自体静脉内皮细孵种植于人工血管可的方法进行。.×
。即可传代培养。用—液
率‘我们在使用自己制备的内皮细胞生长因子成轻洗细胞单层—遍,培养皿内加入. 胰蛋
功地将人脐静俅内皮细胞作体外长期传代培养和白酶—。轻轻将培养面捺布均匀后,暖出多余
单次传代、大规模体外培养的基础上,又成功地将的消化液。室温下放置左右。待细胞圆缩尚未
成人静脉内皮细胞;的比率进行单次传代培漂浮时,,用
养,现报道如下。。取样
.用;结晶紫溶液作细胞计数。将细胞悬液等
材料和方法量分到两个直径为. 的塑料培养内,每个
培养皿内加入完全培养液。置℃、:细
.大隐静脉条,股静脉条,胃右静::条, 胞培养箱内静置培养每—换液欢。倒置显
右结肠静脉条。患者年龄—岁。静俅长傲镜下观察细胞生长情况。采用徽格法每日计数培
士.,直径士.,. 养细胞总数。
.采用原位获取法获取成人静噩士:内皮细胞,
本过程如下:.×/’后,用上述方法消化获取细
段。于静脉近远端各作一切口,分别插入带有开关的胞,并置液氟冻存。方法为:用细胞冻存液
号塑料静脉输液管。从远心端用%小牛血清%二甲基亚砜制成
培养液冲洗血管腔,直至无血迹。灌入—ב/细胞悬液,装入塑料冻存管内管,
. 皎原酶公司出品。关闭静脉两端开置一℃冰箱内,再将其移至液氟面上—
关。将静脉从活体上取下。立即投入盛有—后,投入液氯内保存。复苏时,从液氟内取出冻存管,
液的无菌保温杯内。孵育。将静脉段取立即投入℃水浴内解冻。吸出细胞悬液./
出。收集消化液用含小牛血清的离。用—液洗涤细胞两次。换
美国公司培养液冲洗静完全培养液制成细胞悬液。取样,用· 的
脉。将消化液与冲洗液一起收集入离心管。/ . 。取样,
离心。去上清液。加入完用—结晶紫溶液计数所获细胞总数以×
。置℃、
释沉淀细胞。。
液次。取样,用;的.
色,计数活细胞数