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大鼠骨髓源性内皮祖细胞的体外分离、培养及鉴定
叶露薇,王志冈,张萍
重庆医科大学附属第二医院超声影像学研究所,重庆,
提要:目的:体外分离、扩增培养大鼠骨髓源性内皮祖细胞,并进行生物学特性鉴定,为后续实验研究提供材料准备。方法:采用密度梯度
离心法和差速贴壁法分离获得单个核细胞,置于特殊培养基一进行扩增培养,对细胞行免疫荧光法检测、、的表
达情况,摄取——、结合—一双染色鉴定及细胞迁移实验。结果:刚分离的单个核细胞小而圆,诱导培养左右细胞开始
变大,部分呈梭形或多角形,周左右呈条索状排列;细胞免疫荧光法鉴定、、为阳性,细胞既能吞噬——又能与
—一结合;细胞迁移实验可见每个视野迁移细胞数为.±.个。结论:通过密度梯度离心法和差速贴壁法能成功获取单个核
细胞,在特定培养基一中培养后可分化成为内皮祖细胞,为后续实验提供了细胞来源。
关键词:皮祖细胞;体外分离;密度离心法
中图分类号:. 文献标识码: 文章编号:———
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内皮祖细胞是一种能够直接分化成为血管内皮细胞. 实验方法
的前体细胞,在损伤、缺血及药物等因素的刺激下均可以动.. 大鼠骨髓源性的体外分离培养
员骨髓中的进人体循环并在各种趋化因子作用下逐步至大鼠颈椎脱臼处死,%酒精侵泡,无
募集到缺血或者损伤处分化成成熟的内皮细胞,促进缺血组菌条件下分离出胫骨和股骨,剪断两端,用培养基反复冲洗
织器官的内皮细胞修复及恢复血供—。所以,已经越骨髓腔至骨干发白,将收集的液体转入离心管
来越多的应用于各种组织器官损伤的修复和再生治疗,但是离心,弃上清液加入培养基重悬后,缓慢移至装有等量
其发挥作用的前提是干细胞的归巢。如何提高的归巢淋巴细胞分离液的离心管中,常温离心。轻轻
数量,是移植治疗各种疾病的关键所在。而目前干细吸取离心管中间乳白色云雾状的单个核细胞层至新的离心
胞移植都存在移植率低的问题。近年来,超声微泡药物载送管中,加入等量后吹打离心后,弃上清液加入一
系统因为它可保持各种治疗性物质的活性和稳定性,避免它培养基重悬细胞,反复轻轻吹打成单细胞悬液后接种在
们在血循环中被破坏和降解,同时超声造影剂对超声波敏预先用大鼠纤维黏连蛋白铺被的培养瓶或共聚焦培养皿中,
感,在靶区给予超声辐照,可达到靶向给药的目的,增加局部℃、%的培养箱中培养,后首次换液,去除为贴壁
的治疗效果并减少用药剂量和实时的超声造影图像能够帮的细胞,以后每换液,等细胞融合到%左右进行传代。
助监控释药、治疗过程,验证药物的活性。成为超声造.. 大鼠骨髓源性生长曲线的绘制
影领域研究的热点。因此,我们设想利用超声造影剂为载体当细胞生长融合到%左右后,用胰蛋白酶消化后,以
传递于细胞促进细胞归巢。因此,本实验采用密度梯度离心一重悬细胞,按每孔个细胞,接种到孔板
法。在体外获得大鼠骨髓源性单个核细胞,进行诱导培里,用法测定至的吸光度值值,每组设个
养扩增并进行鉴定。复孑,计算每组平均值,根据培养时间及值绘制
生长曲线。
材料和方法.. 细胞免疫荧光鉴定