文档介绍：甕●:篟‘●
论文作者签名:凝重疋㈧论文作者签名:缀超友晟显律廊日期:,年骆荩海南大学学位论文原创性声明和使用授权说明学位论文版权使用授权说明原创性声明日期:矽压澄卮⑸坏生;旦三生蕉壶。本人郑重声明:所是交的学位论文,是本人在导师的指导。卜.,独立进行研究荆鹤魉〉玫某晒除文中已经注明引用的内容外,本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰弓过的作晶或成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体,均已往文中以明确方式标明。、保存、使川学位论文的规定,即:学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版,允许论文被究阅和借阅。本人授权海南人学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索,可以采川影印、缩印或扫描等复制手段保存和“呓妊宦畚娜氖菘狻敝腥姆⒉迹⒖砂承担。汇编本人已经认真阅读“咝Q宦畚娜氖
摘要是热带及亚热带国家重要的经济果树,因其营养价值高,在医药和化工上有着广泛应用。年番木瓜基因组测序也已经完成,对番木瓜重要功能基因分析变得同益重要,高质量原生质体获得,并在此基础上建立系统稳定的基因瞬时表达体系,将为基因功能验证提供良好的分析平台,这也意味着果树中模式植物的番木瓜将在生物学相关领域研究发挥极其重要作用。此外,原生质体同时还提供一种单细胞模型去研究病毒侵染和复制相关病理。番木瓜环斑病毒砹迨鞾病毒科,马铃薯《臼是番木瓜种植区最具破坏性的病害,虽然转基因番木瓜抗一般被认为是长期控制病毒的策略,但不同地区病毒株系存在差异,这限制了转基因番木瓜的推广与应用。为进一步了解相关侵染,介导的基因沉默以及与宿主相互作用从而制定出新的抗病策略,那么利用分离获得高质量原生质体这一单细胞侵染模型,进一步对番木瓜侵染与复制机理研究尤为重要。本论文以番木瓜实生苗幼嫩叶片为材料,系统考察并研究了影响番木瓜原生质体分离与榈嫉脑侍逅彩北泶锵关重要因子,并初步建立了番木瓜叶肉原生质体瞬时表达体系,为进一步的细胞与分子生物学实验操作奠定了基础。一些非生物关键因素,如酶的混合液浓度、酶解时问与酶液值,直接影响植物原生质体分离。每种植物均存在特定的最佳分离条件,迄今,已有许多报到关于不同植物最佳原生质体分离条件报到,然而目前在番木瓜叶肉细胞原生质体分离上,】,而也曾报道从番木瓜叶片中获得.。叶肉原生质体产量以及%的存活率,但我们可以看出其原生质体产量与存活率并不十分理想,原生质体产量以及存活率都有很大提高的空间。本研究以采用正交实验设计研究酶混合液浓度、甘露醇浓度、酶解时间对番木瓜叶肉原生质体分离影响,优化了原生质体分离条件。结果显示,度与酶解时间是影响原生质体产量的关键因子,猰ǘ榷栽侍宕婊盥势鹬要作用。同时对酶液值单因子实验发现,酶液值对原生质体产量和存活率影响显著。番木瓜叶肉原生质体分离最佳条件是酶混合液组成为%,,本研究继续对榈嫉姆竟弦度庠侍逅彩被虮泶镏饕S响因子进行了研究,考察了肿恿俊浓度,饔檬奔洹⒅柿Eǘ鹊纫蛩对瞬时表达率的影响。结果表明:以柿..张ǘ,原生质体浓度为个/,培养方式为℃,培养平均转化率可达%。关键词:番木瓜,原生质体,分离,彩北泶番木瓜%
,琈琩】,【—琍猰,,,.,,—...畐—,瑂瓻琣,
.甌癝%,甅,瑃痗,琍,珿籇—%:%,—琺琲琍·,甌琣%.
缩略词简写符号英文全名中文全名【狹吗啉一撬聚乙烯吡咯烷酮荧光素二乙酸酯鲜重牛血清白蛋白最小显著差别聚合酶链式反应绿色荧光蛋白葡萄糖苷酸梅半乳糖苷酶过氧化氢酶荧光素酶聚乙二醇瓼