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家兔离体小肠平滑肌生理特性
[目的要求]
1、学****离体肠段平滑肌的实验方法。
2、了解肠段平滑肌的生理特性。
[基本原理]
哺乳动物消化管平滑肌与肌肉组织共有的特性,如兴奋性、传导性和收缩性等。但消化管平滑肌又有其特点,即兴奋性较低,收缩缓慢,富有伸展性,具有紧张性、自动节律性,对化学、温度和机械牵张刺激较敏感等。这些特性可维持消化管内一定压力,保持胃肠等一定的形态和位置,适合于消化管内容物的理化变化,在体内受中枢神经系统和体液因素的调节。将离体组织器官置于摸拟体内环境的溶液中,可在一定时间内保持其功能。本实验以台式液作灌流液,在体外观察及记录哺乳动物离体肠段的一般生理特性。
[动物与器材]
兔、恒温平滑肌槽、支架、烧杯、20ml注射器、张力传感器、生物机能实验系统、温度计、台式液、肾上腺素(1:10000)、乙酰胆碱(1:10000)、阿托品针剂(1支)。
[方法与步骤]
1、 装好实验装置,平滑肌槽恒温调至37°C。
2、 制备离体兔肠段
用木槌猛击兔后头延髓部,致其昏迷后立即剖开腹腔,找到胃幽门与十二指肠交界处。在十二指肠起始端扎一线,取出十二指肠、空肠、放入冷台式液内。先用20ml注射器冲洗内容物,(每一实验小组一段)在其两端结扎,一端做一短线环固定在通气的浴皿内,另一端扎线与张力传感器相连。将肠段完全浸浴在调好温度的平滑肌槽中,并调整好台式液充气量(小气泡接连不断)。
3、开启生物机能实验系统,接通与张力传感器相连的通道。固定管并调节扎线与张力传感器,使肠段运动自如又能牵动传感器(注意:扎线不可贴壁或过紧过松)。调节增益与扫描速度,使肠段的运动曲线清晰地显示在显示器上并记录肠段活动曲线。
4、实验观察
记录对照肠段运动曲线后,停止供气1分钟并记录曲线变化,同时观察肠段紧张度变化。当出现明显变化后,立即恢复供气。用新鲜37°C台式液冲洗,待恢复正常(注意作好标记)。
记录对照肠段运动曲线后,加入25C台式液,并记录曲线变化,同时观察肠段紧张度变化。同法,当出现明显变化后,立即用37C台式液冲洗,待恢复正常。
同法加入45C台式液并记录曲线变化,同时观察肠段紧张度变化。当出现明显变化后,立即用新鲜37C台式液冲洗并待恢复。
由于以上流出液中未加入药物,可以回收使用。以下加入药物的流出也不可再用。
同法,加入2滴肾上腺素(1:10000),观察并记录曲线变化。
同法加入1〜2滴乙酰胆碱(1:10000),观察并记录曲线变化。
加入3滴阿托品后立即加入于(5)同样剂量的乙酰胆碱,记录并观察曲线变化。同(5)比较曲线有何不同。
注意:1加药前必须准备好更换用的37C台式液。上述药物剂量只是参考,效果不明显可补加,每次加药出现效果后,必须立即更换浴槽内的台式液并冲洗3次,待肠肌恢复正常后在观察下一项目。浴槽内台式液要保持一定温度。
2游离及取出肠段时,动作要快,取兔肠及兔肠穿线时尽可能不用金属及手指触及。为保持离体肠段的活性,可先预冷充氧的营养液,游离肠段及穿线在预冷的营养液中进行。实验中始终通气。
[思考题]
1、本实验是否可用麻醉动物的肠段?为什么?
麻醉状态影响肠段细胞的反应性以及对药物的敏感度
2、进行哺乳动物离体组织器官实验时,需控制哪些条件?温度:本实验控制恒定温度37度湿度:要时刻记住用相应的润湿液润湿,本次试验用哺乳动物的台氏液PH:要与哺乳动物体液相似避免不必要的刺激:不要用手或者是金属触碰离子成分与浓度:要与相关的动物体液相似,本实验是台氏液
3、为什么加入各种药物会引起离体肠段活动的变化?其机理是什么?
dr对其是抑制作用••可见离体肠管活动减弱,描记曲线出现收缩频率变慢,幅度减小以及基线下移・・・
ach是促进作用,••可见离体肠管活动增强,•描记曲线出现收缩频率变快,幅度增加。出现上述现象的机理,与消化道平滑肌细胞产生动作电位的离子基础是Ca2+的内流有关。
阿托品是ach的阻断剂。所以两者加入个观察到曲线无明显变化。阻断乙酰胆碱与肌膜上的M受体结合。
HCL离体肠管活动减弱,描记曲线出现收缩幅度降低,频率变慢。・・・H+升高能干扰肌肉的代谢和肌丝滑行的生化过程:H+能与Ca2+竞争钙调蛋白的结合位点而使肌球蛋白ATP酶活性降低;使肌原纤维对Ca2+的敏感性和Ca2+从肌质网的释放量减少。加了NAOH肠管活动增强。・••中和了H离子••改变了细胞外液的卩円值・••所以恢复正常・・
4、加入阿托品后再加入乙酰胆碱,肠段活动受到抑制,为什么?
这两种药对肠道平滑肌的作用正好相反,乙酰胆碱能促进肠道平滑肌蠕动,阿托品是胆碱能神经阻断剂,能抑制肠道平滑肌蠕动。两药同时使用,阿托品阻断了乙酰胆碱的作用,所以表现出肠道活动受到抑制。
5、根据实验结果,说明平滑肌的生理特性
消化管平滑肌又有其特点,即兴奋性较低,收缩缓慢,富有伸展性,具有紧张性、自动节律性,对化学、温度和机械牵张刺激较敏感等。这些特性可维持消化管内一定压力,保持胃肠等一定的形态和位置,适合于消化管内容物的理化变化,在体内受中枢神经系统和体液因素的调节。将离体组织器官置于摸拟体内环境的溶液中,可在一定时间内保持其功能。