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撇蝴寥钰蹦撕\\‘\\易耖赁捌薹修咱崖国农业科学院硕士学位论文评阅人、答辩委员会签名表转基因体细胞克隆猪胚胎的制备基因与细胞论文作者专业研究方向指导教师李奎培养单位芯克北京畜牧兽医研究所硕导师论文题目黄雷工程姓名职称单位签名动物遗传育种与繁殖评硕导口华中农业大学动物科动物遗传育刘榜教授阅博导团技学院种与繁殖北京农学院动物科学人刘云海研究员技术系答辩吴常信院士中胡兰公安部物证鉴定中心遗传学中国农业科学院北京许尚忠畜牧兽医研究所马月辉委储明星员王立贤博导回博导口会议记录厥牟玉莲博士时间:年月日上午论文答辩时间地点地点:北京畜牧兽医研究所科研楼二楼第一会议室主田见晖
研究生签名前需研究生签名:学雷时间:厶,,年山年‘独创性声明关于论文使用授权的声明时间:知,,年多缛本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知,除了文中特别加以标注和致谢的地方外,论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果,也不包含为获得中国农业科学院或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。本人完全了解中国农业科学院有关保留、使用学位论文的规定,即:中国农业科学院有权保留送交论文的复印件和磁盘,允许论文被查阅和借阅,可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意中国农业科学院可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。导师签名:时间:廴
摘要本文所用的卵巢采集自北京市顺义区鹏程食品有限公司屠宰车间,于小时运送回实验室,运输温度为.℃。。试验旨在摸索猪卵母细胞孤雌激活的电场强度和脉冲时间,并探索渗透压阶段培养法对孤雌胚胎后期发育的影响。猪卵母细胞成熟培养螅直鹪诘绯∏,分别培养于渗透压为中,∏,;。结果提示猪卵母细胞孤雌激活需要较高的电场强度../龀迨奔洳灰斯母呱嘌母ㄖせ钣兄于孤雌胚胎的后期发育。应用红色荧光基因昙俏逯干街硖ザ上宋赴魑V硖逑赴寺〖际跗教ǖ募觳信号,仅仅通过荧光激发就能识别是否是转基因猪,而不通过繁琐的分子生物学检测技术而直观检测,且在胚胎制作过程中可以实时观察制作过程的技术及方法是否可行,对于转基因猪制备有意义。本项研究采用五指山猪近交系的胎儿成纤维细胞,利用脂质体转染试剂盒将;街硖ザ上宋赴赴;粜月/,达到本项研究的要求,两种阳性细胞克隆筛选方法均能满足下一步研究所需。试验证实本研究获得的转虻奈逯干街硖ザ成纤维细胞是可用的,所采用的技术路线及方法是科学的、可靠的。在赴秆」讨校颐抢闷胀ǚ亲;蛭逯干街硖ザ上宋赴妥狤蛱ザ成纤维细胞锌圃赫越ü鲜墼进行了体细胞克隆实验,通过融合率、卵裂率、囊胚率这几个指标对技术平台的各个环节进行逐一调整和优化,提高了单个卵巢卵母细胞的平均获得率枚跎倭讼晕⒉僮魇奔,由此提高了体细胞克隆的效率蚜崖ィ遗呗ィ,并同时开展了移植实验,目前已经移植四头母猪,后续实验正在进行中,移植效率有待进一步检测。关键词:孤雌生殖,高渗,,电激活,核移植/和脉冲时间/和、的/、、/
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目录第一章绪论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯猪卵母细胞成熟过程⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯猪卵母细胞的孤雌激活⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。体细胞核移植⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯第二章猪卵母细胞成熟培养与孤雌激活⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.试验材料⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。.⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.绯∏慷扔肼龀迨奔涠怨麓婆咛シ⒂⒂挠跋臁对孤雌胚胎发育的影响⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.第三章转ü饣蛑硖ザ上宋赴档慕ⅰ璴试验材