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聊签名:药殿。‘研究生签名:舅、长高‘时问:训年‘月同研究生签名:鎏关高独创性:声明关于论文使用授权的声明年彭﨡同和年多月琭本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知,除了文中特别加以标注和致谢的地方外,论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果,也不包含为获得中国农业科学院或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同丁作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示了谢意。本人完全了解中国农业科学院有关保留、使用学位论文的规定,即:中国农业科学院有权保留送交论文的复印件和磁盘,允许论文被查阅和借阅,可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意中国农业科学院可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。时问:时间:
/批。一。乞瓯烙’孑训勿御跳哆狍茜动易多、:眵黟生物化学与分子生物影中国农业科学院博士学位论文评阅人、答辩委员会签名表适合转基因抗虫水稻和棉花觳獗曜贾柿5墓菇ḿ笆杂论文作者苏长青生物安全研究方向转基因生物安全指导教师彭于发培养单位芯克⒅行植物保护研究所职称单位专业中国农业大学食品食品科学黄昆仑教授:科学与营养学院全国农业技术推广王春林研究员植物保护服务中心昆虫学中国农业科学院棉崔金杰花研究所答辩中国农业科学院植吴孔明农业昆虫与害虫防治物保护研究所谢道听清华大学生物化学与分予生物学中国农业科学院生王志兴生物化学与分了生物学物技术研究所中国农业科学院作李新海中国科学院微生物物科学研究所农业微生物学刘杏忠研究所中录厥陈秀萍月丈衔点,植保所第二会议室论文答辩时间地点论文题目姓名签名评阅人二席员
摘要,通过在载体的克隆位点和在转基因检测领域,标准质粒以容易获得、纯度高、成本低和稳定性好的优点逐渐发展成为受欢迎的一种标准物质娲,更适合同时对多个靶标基因的检测。为解决阳性标准物质不容易获得的困难,本研究构建了适合常见转基因水稻和棉花产品觳獾乃母霰曜贾柿#我国鲎;蛩酒废岛鲎;蛎藁ㄆ分品系Q芯坎牧希云渥魑1曜嘉镏试谧基因检测中的适用性进行了初步验证。主要结果如下:构建了适合于转基因抗虫水稻科丰牌废堤匾煨约觳獾谋曜贾柿.⒘相应的实时荧光定量觳夥椒ā8弥柿Hǔの,通过在靥宓目寺∥坏愫盖形坏惴直鸩迦雊蛄泻涂品号伺圆嘈蛄泄菇ǎ1蘸匣纷此碊。建立了基于伺圆嘈蛄械目品号产品品系特异性实时荧光定量椒ā’旁侧和两个标准曲线的相关系数分别为和,扩增效率直鹞%。对ズ蚻%两个混合样品进行定量检测,评价和验证所建立的定量方法,结果显示准确性偏离率分别为甇%.%。表明本研究建立的考觳夥椒ǹ梢杂糜诤锌品号转基因水稻产品的品系特异性定量检测,所构建的标准质粒甂可以代替其基因组魑1曜嘉镏适褂谩构建了适合于转基因抗虫水稻汕优品系特异性检测的标准质糕,建立了相应的实时荧光定量觳夥椒ā8弥柿Hǔ酶切位点分别插序列和汕优伺圆嘈蛄泄菇ā;’┰效率直鹞ズァ<觳庀尬猯奖矗肯尬拷贝。.%和ァR陨辖峁砻鳎狙芯拷⒌腜定量检测方法可以用于含有汕优转基因水稻产品的品系特异性定量检测,所构建的标准质粒梢源嫫浠蜃魑1曜嘉镏适褂谩结合对多靶标进行考觳獾募际跻G螅剿鞴菇耸屎嫌诳嗣镜个转基因抗虫水稻品系特异性检测的多靶标标准质粒⒘讼嘤Φ氖凳庇ü舛縋检测方法。该质粒全长为,通过在靥宓目寺∥坏阋约霸靥迳系腅雒盖形坏惴直鸩迦胨母鲎;蛩’和伺圆嘈蛄幸约八緂甈和个内标准基因序列构建。为验证糜诙喔鲎;蛩静范考觳獾氖视眯裕钥品藕涂嗣舅狙稤为检测对象,选择基因作为定量的内标准基因,分别建立了针对科丰藕涂嗣个抗虫水稻产品的品系特异性定量觳夥椒ā6考觳庀蘧贝。应用所建立的觳夥椒ǚ直鸲%和チ礁鲎;蚝康目品号和克螟稻水稻样品辛硕考觳庋橹ぁ?%和ァ?嗣径考觳饨峁淖既沸员曜计ú.%。以上结果表明,屎献魑1曜嘉镏替代品用于有关转基因水稻产品的考觳狻
针对我国转基因抗虫棉常用的主要转基因元件和外源基因类型,结合对多靶标对象进行考觳獾募际跻G螅菇耸屎嫌谖夜壳白;蚩钩婷藁ú芳觳獾亩喟斜瓯曜贾柿,建立了针对不同靶标对象的实时荧光定量觳夥椒ā8弥柿Hǔの,在靥寤∩瞎菇ǎ–启动子、启动子、罩棺印⑨嬷罩棺印标记基因、刀抗虫基因和钩婊虻个外源基因靶标序列和棉花内标准&刃基因序列。根据上述钩婊虻茸;蚣觳獍斜晷蛄泻刃棉花内标准基因对多靶标序列定量检测的技术要求