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/㈣嬲荛障导师签名:嘞彩≯纵../论文作者签名:葺互轧论文作者签名:葺圣比髟月论文作者签名:军盔‘丸亿日海南大学学位论文原创性声明和使用授权说明细笠自日期:扣原创性声明学位论文版权使用授权说明刀年多月日期:辏日期:砂年多月囊文提交“咝Q宦畚娜氖菘猓腥姆⒉迹⒖砂础罢鲁獭敝泄娑ㄏ硎芟喙权益。同意论文提交后滞后:口鷂;曰二生;口二笙发查。本人郑重声明:所呈交的学位论文,是本人在导师的指导下,独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外,本论文不含任何其他个人或集体己经发表或撰写过的作品或成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体,均已在文中以明确方式标明。本声明的法律结果由本人承担。本人完全了解海南大学关于收集、保存、使用学位论文的规定,即:学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版,允许论文被查阅和借阅。本人授权海南大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。本人在导师指导下完成的论文成果,知识产权归属海南大学。保密论文在解密后遵守此规定。日期:本人已经认真阅读“咝Q宦畚娜氖菘夥⒉颊鲁獭保饨ū救说难宦导师签名:日..,
摘要畇甤璉起的香蕉枯萎病是香蕉的毁灭性病害。为了给深入研究朕卓拐婢現与香蕉之间互作的分子机理提供理论依据,本研究从尖孢镰刀菌古巴专化型派硇≈,对他们进行基因敲除,分析它们的表型变化,初步确定它们在尖孢镰刀菌⒛久、的两个尖孢镰刀菌的鞍捉鲅腔葱越系停撇飧没蛭狥囊桓鲂碌腉蛋白腔颉;騀一狥奶赜谢颍云浔嗦氲陌被嵝蛄薪蟹为了解这两个基因的作用,本实验对这两个基因进行基因敲除。首先利用带有绿色,荧光蛋白基因的谓性侍遄;玫铰躺ü獾鞍妆昙堑腇辏他真菌的对峙培养实验中,基因缺失菌株表现出对供试的木霉菌具有一定本实验通过分析两个基因核酸序列及氨基酸序列,和利用基因敲除方法初步探索两个未知基因的功能,为深入研究两基因的生物学功能奠定了基础。同时本实验还尖孢镰刀菌古巴专化型現的基因库中挑选了推测的两个相关基因古巴专化型派硇≈种械淖饔谩对编码的氨基酸序列进行分析,发现基因具有岷衔坏恪⒒坊腺苷酸作用位点、鞍譸吖亚基复合体结合位点,假设的膜受体结合位点。同时氨基酸序列比对结果显示,该序列与粗糙脉胞菌·稻瘟菌腉蛋白腔被嵝蛄芯哂薪细咄葱裕爰褐析,发现该基因产物具有一段约霭被岵谢笮〉囊旌颂宀磺缀偷鞍,的保守基序,推测该基因与异核体不亲和相关。确定了原生质体转化体系。随后构建了銮贸靥澹⒂孟拗菩阅谇忻附糜转化的片段切下,通过原生质体转化,将含有同源序列的巫;罠校获得基因缺失突变体,其中基因缺失突变体具有绿色荧光蛋白基因。突变体表型分析发现,两个基因缺失突变体在菌丝形态上与野生型有些差异,并且都表现出耐热性的提高。而在菌落形态,孢子形态,生长速率与野生型并没有太大差异。在与其的抗性,而野生型菌株没有抗性,表明该基因在与其他真菌的互作中具有一定的作用。在致病性上,两个基因缺失突变体与野生型无明显差异。确定了香蕉枯萎病病原菌的基因敲除体系,为该病原菌基因库中其他基因的功能研究提供了技术支持。关键词:尖孢镰刀菌古巴专化型;原生质体转化;基因敲除;功能甤
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