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实验目的
通过本实验学****PCR反应的基本原理与实验技术。
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实验原理
聚合酶链式反应(polymerasechainreaction,PCR),是一种在体外快速扩增特定基因或DNA序列的方法,故又称为基因的体外扩增法。
在待扩增的DN***断两侧和与其两侧互补的两个寡核苷酸引物,经变性、退火和延伸若干个循环后,DNA扩增2n倍。
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PCR技术的原理
:在加热或碱性条件下可使DNA双螺旋的氢键断裂,形成单链DNA,称之为变性。
:是模板与引物的复性。引物是与模板某区序列互补的一小段DN***段。
:从结合在特定DNA模板上的引物为出发点,将四种脱氧核苷酸以碱基配对形式按5’→3’的方向沿着模板顺序合成新的DNA链。
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(c)
(b)
引物2
5’
3’
3’
3’
5’
5’
(d)
新引物
5’
3’
靶DNA的扩增
(a)
5’
3’
引物1
3’
5’
3’
5’
引物2互补链
引物1互补链
单位长度的链
不同长度的链
5’
3’
3’
5’
引物1互补链
引物2互补链
目的片段(不同长度的链未示出)
聚合酶链式反应示意图
(e)
(f)
(g)
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温度(℃)
时间(min)
94
72
60
94℃变性(1min)
60℃退火(1min)
72℃延伸()
循环1循环2循环3
PCR反应的温度循环周期
PCR反应的每一个温度循环周期都是由DNA变性、引物退火和反应延伸三个步骤完成的。图中设定的反应参数是94℃变性1min,60℃退火1min,72℃。如此周而复始,重复进行,直至扩增产物的数量满足实验需求为止。
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一般PCR反应条件
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实验仪器
电泳仪
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琼脂糖凝胶电泳槽
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