重组蛋白制备.ppt

文档介绍：如何获得重组蛋白?
重组蛋白制备
重组表达载体构建
目标蛋白重组表达
最高效的蛋白分离纯化方法——亲合纯化
重组表达载体构建
基因克隆
基因克隆(Gene Cloning):
亦称分子克隆技术。将某特定基因或DN***段插入到载体分子中,并筛选获得纯化(克隆)重组子的技术。
基因克隆程序
1)目的基因片段获得
2)目的载体的获得
3)目的基因与载体DNA的限制性酶切
4)酶切目的基因与载体DN***段的连接重组
5)连接重组质粒转化大肠杆菌
6)含目的基因插入片段的重组子鉴定
基因克隆所需通用材料
需要克隆的目的DN***段。
克隆载体,用于接入目的DN***段。
限制性内切核酸酶,消化目的DN***段与克隆载体,产生连接反应所需要的DNA粘性末端。
DNA连接酶,将目的DN***段与克隆载体连接在一起,构建重组载体。
大肠杆菌感受态细胞,用于筛选含有插入目的DN***段的阳性克隆。
基因克隆流程图
一、目的基因片段获取
1)聚合酶链式反应——PCR
2)反转录-聚合酶链式反应——RT-PCR
PCR
PCR:
Polymerase Chain Reaction
多聚酶链式反应
美国Kary
(1993诺贝尔化学奖获得者)