文档介绍：福建农林大学
硕士学位论文
PEASC表达载体构建及其农杆菌介导的水稻遗传转化研究
姓名:王晓锋
申请学位级别:硕士
专业:生物化学与分子生物学
指导教师:何水林;郑金贵
摘要植保素是植物在病原菌等生物诱发因子或非生物诱发因子诱导作用下合成保素。是植物在长期进化过程中形成的重要抗病机制之一。通过基因工程技术,强化转基因植物植保索的抗病功能,可能是植物抗病遗传改良的有效策略之一。,构建适合水稻转化的表达载体,在建立起适合于供试水稻品种的农杆菌介导的高效遗传转化体系基础上,进行海籆的水稻遗传转化,获得转基因水稻植株,这为进一步开展蛟谒镜戎饕W魑锟共』蚬こ躺峡赡芾眉壑灯兰鄣难芯刻供了重要材料。主要研究结论如下:尤钟盏寂嘌即//中筛选出适合于供试水稻品种的培养基:以为基本培养基,进一步筛选出分化培养基并对愈伤分化时间作了较为系统的研究,在此基础上建立起适合于本研究供试水稻品种的遗传转化体系。ü齪狿的酶切、电泳、目的片段回收,将克隆在质粒上的目的基因寺〉剿1泶镌靥錺的相应酶切位点上,构建出籔表达载体。冻溶法将表达载体导入根癌农杆菌,选阳性克隆,获得含有目的基因的工程菌。靡呀ǖ囊糯;逑岛凸こ叹运九咝杂宋2牧希信└司介导的遗传转化,共获得株抗性植株。杓瞥ざ确直鹞奶匾煨砸铮婊≡株抗性植株进行觳猓又猩秆〕株阳性植株并对其进行两个泳道出现条带:幸恢瓿恃粜裕实タ奖床迦耄篢有瓿恃粜裕植保素水稻农杆菌介导的遗传转化的具有抗病作用的小分子次生代谢物质。植物在病原菌侵染作用下诱导合成植本研究利用从辣椒上克隆的决定辣椒倍半萜植保紊合成的关键酶一倍半帖合成酶分析。结果有呈双拷贝插入。关键词:福建农林大学硕士学位论文猘
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把植保素研究概述植保素是植物在生物诱发因子或非生物诱发因子诱导作用下合成的小分子次生代谢物质,它能够抵抗或抑制入侵病原菌的扩展,是植物防止病原菌侵害病原菌的兰花块茎置于琼脂糖培养基上,发现培养基也能抑制病原菌进一步扩展。年和陬静÷砹迨砜榫ブ屑觳獾娇拐菌物质,首次提出植保素概念。年等分别从豌豆和菜豆中分离鉴定出豌豆紊和菜豆紊两种植保索。年虶的研究表明:大豆对鲋值目剐杂氩≡秩咀饔孟掠盏己铣傻闹脖K赜关。之后,随着同位素标记技术、植物细胞培养技术的发展,,蔷蔽科、禾本科和葫芦科等至少个科以上的植物上进行过植保索的生物检测、分离、鉴定等工作,其中研究最多的是豆科植物嗡郑。植保素种类繁多,可分为多酚类植保素缫旎仆:屠嗷仆V脖K鞯幕仆:黄烷酮、联苯类植保索的山羊醇、香豆类植保素的香豆索等惠评嘀脖K如倍半萜植保素中的日齐素、草根香酮等簧锛钪脖K如甲基一卜甲氧基一吲哚一人;炔类植保素绶押秃躧中的人参二醇恢舅崂嘀脖K如花生甲基亚麻酸等惠祯ɡ嘀脖K鞯鹊取K淙恢脖K饔卸嘀掷嘈停鸌女有以下共同特点:抗病作用。植保素具有拮抗病原菌、对病原菌在奇主细胞内的扩展有一定程度的抑制作用,它对真菌的抑制作用高于其对细菌的作用龋植保素仅在生物诱发因子绮≡或非生物诱发因子鏑!⒆外线等饔孟潞铣伞⒒郏谡V参锵赴胁⒉缓铣何水林等,:何水林等,】籔龋。植保索对病原菌抑制作用的专化性不强。即一种植保素往往对一种植物以上的多种病原菌,甚至其他种植物上的病原菌都具有抑制作用龋。的重要物质龋籘等,;等,;植保索的研究始于年,当时的法国植物学家癲将感染植保索的研究逐步推向分子水平。目前己在豆科、茄科、菊科、兰科、葡萄科、植保素均为小分子次生代谢物质,其分子量一般小于。等,:龋籟等,福建农林大学硕士学位论文
蕊。从姜、、甲羟戊酸——瓹,二萜—。根据异戊二烯单位的多少,萜类物质可分为单萜、倍半萜、二萜、四萜等。其中单萜、倍半萜和二萜的合成,分别由异戊二烯中央代谢途径中的中间产物和,在单萜环化酶、倍半萜环化酶和二萜环化酶的催化作用下环化、合成其相应的前体化合物,再经过进一步的修饰反应缂谆⑼鸭谆乙酰代谢支路代埘物例子代谢物功能单萜薄荷醇香料、参与植物一昆虫参与植物病原菌相辣椒醇、日齐索互作用植物生长调节剂或参与植物与病菌相互作多萜醇、、羟基化、脱羟基、异构化、还原等铣伞V参镆煳於┲醒氪煌揪⋯⋯⋯⋯异戊烯基激动索生长调节物质相互作用次生代谢,栋胼菜油甾醇参与细胞膜的结构和功能赤霉素、蓖麻素醌、类胡萝糖基化作用、电子传递、光保护如图所示。物甾醇用素福建农林大学硕士学位论文\图卜参镆煳於┲醒氪煌揪
.栋胼浦脖K厣锖铣捎氡栋胼苹坊已在辣椒、烟草、番茄、马铃薯等多种茄科植物中发现辣椒醇、臼齐索、罗宾姆索等倍半萜植保索。不同茄科植物的倍半萜植保素在