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南京农业大学学报。: 一

口;——
普通小麦和黑麦草原生质体
电融合的适宜条件
陈文品吴琴生刘大钧. . .
浦京农业大学农学系漠国洛桑试验站
摘要研究了普通小麦, 多花黑麦单
. 和多年生黑麦单原生质体电融合的适宜
条件。鲒果表明:在同一电场条件下,不同物种原生质体的电融合反应有差异,在
、/交流脉冲和./、直流脉冲下,原生质体排纠成
串, 小麦、多花黑麦草和多年生黑麦草原生质体融合频率分剐为% 。% ,
%; 电场参数中的场强和直流脉冲幅宽对原生质体融合频率影响较大; 融合液
中浓度以.~ /为宜;渗透压较低的融合液有利于原生质体融
合;在适宜的电脉冲处理后,原生质体存活率与对腻相似, 经融合处理的原生质体
培养一个月后,其植板率有所提高。
关键词普通小麦;黑麦草;原生质体; 电融合
中图分类号..
植物原生质体电融合技术正在逐步成为植物体细胞杂交研究的重要手段。目前不仅多种
双子叶植物运用电融合技术获得了体细胞杂种,而且水稻等单子叶植物也有所突破⋯。在
禾谷类牧草中有许多可作为小麦利用的优良种质资源,采用原生质体融合技术进行体细胞杂
交,可以避免有性杂交的不亲和障碍,对远缘种属问的种质转移具有重要意义。
本研究旨在通过小麦和黑麦草原生质体对电融合处理的反应,探索它们电融合的适宜条
件,为小麦与远缘种属植物进行体细胞杂交研究提供依据.
材料与方法
悬浮细胞系的培养
小麦悬浮细胞系由小麦品种幼穗培养建立。细胞团具有
合成叶绿索能力, 呈浅绿至深绿色,在舔加%蔗糖和/. 的液体培养
基中,,/振荡培养,每周继代一次。
多花黑麦草和多年生黑麦草悬浮细胞系由品种和品种幼
穗培养建立。
年月日收稿.
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· · 南京农业大学学报卷
. 原生质体的分离
用于分离的酶液成分均为: % 纤维索酶, .% 果胶酶一和
/ .以上成分溶解在”中嘈;年生黑麦草用,抽滤灭
菌. 取继代后天的悬浮细胞, 加酶液, , ~/振荡酶解~ ,
用孔径尼龙网过滤,再用%甘磊醇加,
的原生质体均持续分裂形成再生愈伤组织.
. 融台仪和融台电极
用,细胞融台仪,输出交流脉冲
、电压~ 高压直流方波脉冲电压, 脉冲幅宽.~. ,
脉冲个数~个任选用镍铬丝电极做微量融合试验,用不锈钢栅形电板融合室容量为
.做融合后培养试验. 电极距离均为.
融台频率的统计

%和原生质体对的融合频率对融台的原生质体数/原生质体总数×%均为
每个处理随机观察个视野××/.
. 原生质体存活率测定及融台后的培养
,将.
融合产物移人塑料培养皿中, 加人等量的培养基两倍盐./
/.一./什%蔗糖% 葡萄糖,.. 用封口,
下黑暗培养.
结果与分析
电融合的过程分两步进行,原生质体首先在交流电场中排列成串,然后在直流脉冲作用
下,,融合液成分