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一、目的
掌握血涂片、骨髓涂片的制作及染色技术。鉴别外周血中各种白细胞的形态特点及分类计数方法。
二、原理
瑞氏染液是由伊红美兰所组成的复合物,经物理吸附及化学作用对细胞进行染色。
三、材料
血针、玻片、酒精棉光学显微镜、香柏油、二甲苯、一次性采血针
四、方法
㈠血涂片的制作
⒈采血:每组两个同学,练习耳垂采血(包括消毒、扎针、挤压、取血),用推片取血液一滴,于玻片右端,从其右侧接触血液,使之成40度角,均匀平稳地向左侧推进,,至血滴推尽为止,其厚度要适中,且有头体尾之分。
⒉待血片干后,滴加瑞氏染液数滴(盖住血膜),静置40秒,加缓冲液等量混匀,染10~20分钟,用水冲洗,干燥后镜检。
⒊镜检计数:在血膜头尾交界处,计数100个白细胞,并对其进行分类。
㈡骨髓片的制备
⒈将临床医生所取骨髓至玻片高端(在准备涂片时,将两玻片倾斜放置),使过多血液流下。
⒉蘸取骨髓适量(选择骨髓小粒部分),以30~45度角,用力推开,速度适宜。然后将玻片于空中挥动,使之干燥,以免细胞缩小或细胞皱缩。
⒊骨髓片制备好后,用标记笔在膜的头部注明病人的姓名、取材部位及穿刺部位。
五、结果
杆状核粒细胞(StabGranulocyte)
细胞呈圆形,直径10-15um。
胞核狭长,弯曲呈带状,两端钝圆。核染色质粗糙呈块状,染深紫红色。
胞质中含特异性颗粒的不同,也可分为中性、嗜酸性、嗜碱性杆状核粒细胞三种,颗粒特点同中幼粒细胞。
中性分叶核细胞
细胞呈圆形,直径10-15um。
胞核常分为2-5叶,以分3叶者多见,叶与叶之间有细丝状相连或完全断开,核染色质浓集或呈小块状,染深紫红色。
胞质丰富,呈淡红色,布满细小紫红色的中性颗粒。
嗜酸粒细胞
嗜酸粒细胞胞体直径11-16um,
胞核多分为近似对称的两叶。
胞质中充密集粗大、大小均匀的桔红色嗜酸性颗粒。
嗜碱性粒细胞
嗜碱性粒细胞胞体直径10-12um
胞核分叶不明显,或融合呈堆集状。
胞质中有稀疏的大小不一、分布不均、呈紫黑色的嗜碱性颗粒,颗粒常掩盖在核上,致使核的轮廓和结构模糊不清。