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(高锰酸钾滴定法)
一实验目的
掌握和学****测定过氧化氢酶活性的原理和方法;
2了解过氧化氢酶的作用。
二实验原理
过氧化氢酶(catalase)属于血红蛋白酶,含有铁,它能催化过氧化氢分解为水和分子氧,在此过程中起传递电子的作用,过氧化氢既是氧化剂又是还原剂。可根据H2O2的消耗量或O2的生成量测定该酶活力大小。
在反应系统中加入一定量(反应过量)的过氧化氢溶液,经酶促反应后,用标准高锰酸钾溶液(在酸性条件下)滴定多余的过氧化氢。即可求出消耗的H2O2的量。
反应式
5H2O2+2KMnO4+4H2SO4
5O2+2KHSO4+8H2O+2MnSO4
三实验器材
10%H2SO4;
;
:称取KMnO4(AR),用新煮沸冷却蒸馏水配制成1000mL,;
:取30%H2O2(),稀释至1000mL,(在酸性条件下)标定。
1 试剂
2 材料:小麦叶片
3 主要设备:离心机,恒温箱,酸
式滴定管
四方法步骤
1、酶液提取
,研磨成匀浆,转移至25ml容量瓶中,用该缓冲液冲洗研钵,并将冲洗液转至容量瓶中,用同一缓冲液定容,4000转离心15min,上清液即为过氧化氢酶的粗提液。
2、滴定:取50mL三角瓶3个(2个测定,另1个为对照),,,,同时计时,于30℃恒温水浴中保温10min,立即加入10%。 
3、,至出现粉红色(在30s内不消失)为终点。
5实验结果
酶活性:每g鲜重样品1min内分解H2O2的mg数表示
式中:A-对照KMnO4滴定mL数;
B-酶反应后KMnO4滴定mL数;
VT-提取酶液总量(mL);
VS-反应时所用酶液量(mL);
W-样品鲜重(g);
T-反应时间(min);
-。
六思考题
简述测定过氧化氢酶的生理意义?
下周实验:实验36
谷物种子萌发时淀粉酶活力的测定