文档介绍：酶的提取与分离纯化
生工131
王国东
201311805115
主要内容
1、酶的提取与分离纯化技术路线
2、细胞破碎
3、酶的提取
4、酶的分离方法
5、酶的组合分离纯化策略
6、酶的浓缩、干燥与结晶
1 酶的提取、分离纯化技术路线
细胞破碎
酶提取
动物、植物或微生物细胞
酶分离纯化
酶浓缩
酶贮存
发酵液
离心分离,过滤分离,沉淀分离,层析分离,电泳分离,萃取分离,结晶分离等。
2 细胞破碎
许多酶存在于细胞内。为了提取这些胞内酶,首先需要对细胞进行破碎处理。
(1)机械破碎
(2)物理破碎
(3)化学破碎
(4)酶解破碎
JY92-II D超声波
细胞粉碎机
细胞破碎珠
高压细胞破碎机
细胞破碎方法及其原理
机械破碎
捣碎法
研磨法
匀浆法
物理破碎
温度差破碎法
压力差破碎法
超声波破碎法
化学破碎
有机溶剂:
表面活性剂
酶促破碎
自溶法
外加酶制剂法
通过机械运动产生的剪切力,使组织、细胞破碎。
通过各种物理因素的作用,使组织、细胞的外层结构破坏,而使细胞破碎。
通过各种化学试剂对细胞膜的作用,而使细胞破碎
通过细胞本身的酶系或外加酶制剂的催化作用,使细胞外层结构受到破坏,而达到细胞破碎
3 酶的提取
方法
3 酶的提取
影响因素
主要影响因素:酶在所使用的溶剂中的溶解度
酶向溶剂相中扩散速度
另外:温度-适当提高温度
pH值-避开酶的等电点
提取液体积-为原料体积的3~5倍,分几次提取
适当搅拌、适当延长提取时间、适当加入保护剂
4 酶的分离方法
沉淀分离
离心分离
过滤与膜分离
层析分离
电泳分离
萃取分离
纯化方案的设计
纯化方法的选择依据——根据有效成分和杂质之间理化性质的差异

纯化方法的排序——先选用粗放、快速、有利于缩小样品体积的方法。精确、费时、需样品少的方法,宜后选用。
5 酶的组合分离纯化策略
5 酶的分离方法
注意
(1)各种酶的纯化方法都有其固有的优缺点
在设计某一酶的纯化线路时,应考虑各种因素对选用的纯化方法及先后次序的影响。
(2)初步纯化(rough fractionation)
除去与目的产物性质差异很大的杂质。
(3)高度纯化(fine fractionation) (精制)
除去与产物性质相似的杂质。