文档介绍：实验二植物染色体组型分析
一、实验目的
1. 学****并掌握根尖处理、染色、压片及制片观察的方法。
2. 观察有丝分裂各时期染色体的形态变化,了解有丝分裂全过程。
、臂比和随体等形态特征;学****染色体组型分析的方法。
二、实验原理
植物根尖的分生细胞的有丝分裂,每天都有分裂高峰时间,此时把根尖固定,经过染色和压片,再置放在显微镜下观察,可以看到大量处于有丝分裂各时期的细胞和染色体。
各种生物染色体的形态、结构和数目都是相对稳定的。每一细胞内特定的染色体组成叫染色体组型。
染色体组型分析就是研究一个物种细胞核内染色体的数目及各种染色体的形态特征,如对染色体的长度、着丝点位置、臂比、随体有无等观测,从而描述和阐明该生物的染色体组成,为细胞遗传学、分类学和进化遗传学等研究提供实验依据。
染色体组型分析大都采用植物根尖等分生组织的有丝分裂中期细胞,染色体制片要求分裂相为染色体分散,互不重叠,能清楚显示着丝点位置。然后通过显微摄影,测量放大照片上的每个染色体的长度和其它形态特征,依次配对排列,编号,并对各对染色体的形态特征作出描述。
三、实验材料
:大蒜
:载玻片,盖玻片,50ml烧杯,温度计,恒温水浴锅,试剂瓶,镊子,解剖针,吸水纸,剪刀,绘图,纸胶水等。
:Carnoy固定液,无水酒精,70%酒精,1mol/L HCL解离液,苯酚品红染液
四、方法与步骤
(一)植物有丝分裂
1、材料处理
1)、大蒜发根将大蒜鳞茎置于盛有清水的小烧杯口上发根,- cm左右时备用(在此过程注意换水)。
2)、根尖预处理在分裂高峰期前(大蒜根尖分裂高峰期为早上八点以及下午两点左右),剪下根尖,置于盛有少量蒸馏水的烧杯并放入冰箱(0—4 ℃)中预处理24h。
预处理的作用,主要是阻碍纺锤丝的形成,使染色体缩短,改变细胞质的粘度,在压片时,有利于染色体的分散。
2、材料固定
经过预处理的根尖,再放到Carnoy液中固定24h以内。固定材料可以转入70%酒精中,在4℃冰箱中保存,保存时间最好不超过2个月。
固定的目的在于将细胞迅速杀死,使细胞结构尽可能保持原来的状态。
3、材料解离
方法:从固定液中取出根尖,用蒸馏水漂洗,再放到:
①1mol/L HCl中,在60℃水浴中恒温解离8—10min;
②解离完毕后,将根尖置于清水中漂洗4-5次,每次1-2分钟,最后一次漂洗时长为5分钟。漂洗目的是将盐酸从根尖中置换出来,以免与后续制片染色的过程造成影响。
4、制压、镜检
切取根尖分生组织放在清洁的载玻片,剥取分生组织,滴加1-2滴苯酚品红染液,染色
8~12 min后加上盖玻片,覆以吸水纸压片,45%醋酸分色,中性树胶封片。镜检。
(二)核型分析
1、显微照相、冲洗和放大
选取5个前期末(或者中期)的细胞进行显微照相。要求染色体分散良好,没有重叠,数目完整,随体和着丝点明显,没有断裂,着色鲜明,形态清晰,且各条染色体处于同一平面上。选定的符合要求的细胞在10×40倍下进行显微照相(可用10×100倍的油镜),然后冲洗,选取图像清晰的底片,放大、洗印出染色体形态清晰的照片。在显微照相的同时,对镜台测微尺进行同样倍数拍摄,放大,然后根据照片上的实际长