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第卷第期广西农业大学学报年月
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一考
水稻白叶枯病菌基因序列的测定分析‘
、/ 一
冯家勋唐纪良马庆生
广西农业大学分子遗传学研究室,南宁
摘要是甘蓝黑腐病菌中全局性调控胞外酶和胞外多搪舍成以及致病性的一个基因簇
中的一个基因. 已从水稻白叶枯病菌中鉴定和克隆到一个在功髓上能互补甘蓝黑腐病菌韵
突变体的基因,并通过构建突变体证实了这一基因在水稻白叶枯病菌致病性中起重要作用。本研
究对水稻白叶枯病苗的这一基因的序列进行了测定分析,结果表明,它与甘蓝黑腐病菌的
前言
,我
们曾鉴定和克隆到一个致病因子调控基因簇基因簇,此基因簇至少含有个基因命
名为憧,—,突变其中的任一基因都会严重降低病菌的致病性及其胞外酶和胞外多糖的
合成,其中的基因是双组份调控系统成员,它编码的产物为感受子与调节子的融合体。
我们从水稻白叶枯病苗.,以下简称基因文库中获得一
个在功能上能互补的突变体,恢复其胞外酶和胞外多糖的合成以及致病性的重组
质粒,并通过杂交及转座子诱变证实了与的基因具有同
源性的基因是位于重组质粒中的片段。通过标记置换
构建突变体及植株试验,巳证实了这一基因在水稻白叶枯病菌致病过程中起着重要的
作用。
本研究对中的片段的序列进行了测定分析,
这一片段中含有一个与的基因在顺序及编码产物的氨基酸顺序上都具有高
度同源性的基因。我们将水稻自叶枯病菌的这一基固也称为盘庀基因。
材料与方法
. 常规操作
质粒的提取、酶解、连接、转化、琼脂糖凝胶电泳等均按等描述的方法“。
· 国家高技术计划资助璜目.
收翦日期一——.
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广西农业大学学报第卷
. 序列测定
序列测定采用描述的双脱氧链终止法。
结果与分析
. 序列测定
为了测定中的片段的序列,我们先把这一片段以两个不
同的取向分别亚克隆到噬苗体质粒从公司购买中的
位点,然后按描述的方法【分别构建了所获得的两个重组质粒的一系列缺
失质粒,并以为帮助噬苗体从公司购买分Ⅱ提取这一系列缺失质粒
的单链,最后以这些单链为模板,用引物按等描述的方法完成了这
片段两条链的序列测定。结果表明,这一片段共含有对核
苷酸图,其含量为.
. 序列分析。
我们将测序获得的对核苷酸序列输入计算机后,以程度对它们进行分
析,结果展示在这些序列中含有一个与编码的基因的开放阅读框架“
极为相似的,这个从位于第核苷酸的起始密码延伸至第核苷酸的
终止密码,含个核苷酸图。
. 序列比较
的这个与的基因的仅相差个核苷酸的为个核苷
酸,这两个的序列相比较,它们之间相同的核苷酸顺序选. ,它们之间的
序列及一和一序列也极为相似比较图从略。
. 氨基酸序列比较
从核苷酸序列推测,的这个编码的蛋白质含个氨基酸图, 比的
蛋白少一个氨基酸。用程度对的这个蛋白的氨基酸序列与的
蛋白的氨基酸序列进行比较,发现它们之间完全相同和相似的序列分别达. 和.
,;图正如所期望的,的这一蛋白与双组份调控系统也具有高度的同源性,与
的蛋白相同,它的一末端和一末端分