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第卷第期广西农业大学学报年月
.。. 曼
水稻白叶枯病黄单胞菌编码顺乌头酸酶
的基因的鉴定
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武波...。唐纪良马庆生..。
一
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广西农业大学实验中心分子遗传学研究室,南宁
英国实验室,诺里奇
摘要通过生化功能分析,证实了水稻白叶枯痛黄单胞菌野生型菌株产生两种顺乌头
酸酵分别命名为。和。通过三亲本接合的方法,将获得的含水稻白叶桔病
黄单胞菌基因簇的重组质粒导入甘蓝黑腐病黄单胞菌基因突变体中。
经生化功能分析证实./中含有水稻白叶枯病黄单胞苗的顺乌头酸酶
同时还证实了能互补,
中含有一个完整的水稻白叶枯病黄单胞苗的顺乌头酸酶基因,该基因具有类似甘蓝黑
水稻自叶枯病是一种严重危害水稻的病害,其致病菌为水稻自叶枯病黄单胞菌—
.。由于病原菌的入侵常导致水稻发病,造成不同程度的损失,减
产幅度可达~ 。有关该病原苗致病的分子生物学机理, 目前了解甚少
在甘蓝黑腐病黄单胞菌. 的致病因子研究中,
等从甘蓝黑腐病黄单胞菌野生型菌株的基因文库中,筛选到一重组质粒
。该质粒能互补甘蓝黑腐病黄单胞菌非致病突变体,恢复其产生胞外酶包括蛋
白酶、果胶酶、纤维素酶、淀粉酶、胞外多糖的能力及在寄主植物上的致病性。进一步研究
发现在中至少含有个致病因子调控基因—
,基因,这个基因分别命名为—“。通过转座子诱变和标记置换.
获得了一基因突变体。该突变体合成胞外酶和胞外多糖的能力降低、致病性减弱。
通过部分序列分析、生化功能测定证实基因编码顺乌头酸酶个人通信。
在前期工作中,我们从水稻自叶枯病黄单胞菌野生型菌株的基因文库中筛选到一
与具有同源性的重组质粒,并证实该质粒中含有与甘蓝黑腐病黄单胞菌
基因功能相似的基因。
本工作的目的是鉴定水稻自叶枯病黄单胞菌野生型菌株是否具有顺鸟头酸酶的
活性及其顺乌头酸酶的种类以及重组质粒是否含有与甘蓝黑腐病黄单胞菌
基因功能相似的基因
车工作为国家高技术研究计射资助项目在英国宴验室完成。
啦稿日期一—。
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广西农业大学学报第卷
材料与方法
. 供试菌株及质粒
试验中所用苗株和质粒及其特征见表。
表供试菌株、质牡的来源和特征
. 培养基及培养条件
供试菌株的培养基、培养条件、所用抗菌素浓度均参照文献的方法。
. 三亲本接合
按等方法进行,以为帮助质粒。
. 胞外酶和胞外多糖的捡测
胞外酶和胞外多糖的检冽按参考文献的方法进行。
. 植株试验
植株试验按描述的方法进行,萝品种为
. 】惯乌头酸酶活性的检测
病原菌接种于相应液体培养基培养过夜后,离心收集菌体,重新悬浮于.
,.中。经超声波破碎细胞后,离心收集上清液,置冰浴保存备用。
.. 顺乌头酸酶总活性的测定顺乌头酸酶总活性的测定参考等的方法进行。
· 顺乌头酸酶种类的测定通过非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳显色后,可检测爆乌头酸酶
的种类。
本试验中非变性聚丙烯酰胺凝胶的制备及电泳条件参考。:的方法进行。电泳
后,取出凝胶,置一玻璃板上。然后用显色覆盖物覆盖凝胶,置℃黑暗中反应,如
有顺乌头酸