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二、色谱分类方法:
色谱分析法有很多种类,从不同的角度出发可以有不同的分类方法。
(一)从两相的状态分类:
色谱法中,流动相可以是气体,也可以是液体,由此可分为气相色谱法(GC)和液相色谱法(LC)。固定相既可以是固体,也可以是涂在固体上的液体,由此又可将气相色谱法和液相色谱法分为气-液色谱、气-固色谱、液-液色谱、液-固色谱。
(二)按固定相的形式分类:
按固定相的形式可分为:
柱色谱:固定相装在色谱柱中;
纸色谱:利用滤纸作载体,吸附在纸上的水作固定相;
薄层色谱:将固体吸附剂在玻璃板或塑料板上制成薄层作固定相
(三)按分离原理分类:
可分为:
吸附色谱法:利用吸附剂(固定相一般是固体)表面对不同组分吸附能力的差别进行分离的方法;
分配色谱法:利用不同组分在两相间的分配系数的差别进行分离的方法。
离子交换色谱:利用溶液中不同离子与离子交换剂间的交换能力的不同而进行分离的方法。
空间排斥(阻)色谱法:利用多孔性物质对不同大小的分子的排阻作用进行分离的方法。
从载气带着组分进入色谱柱起就用检测器检测流出柱后的气体,并用记录器记录信号随时间变化的曲线,此曲线就叫色谱流出曲线,当待测组分流出色谱柱时,检测器就可检测到其组分的浓度,在流出曲线上表现为峰状,叫色谱峰。
色谱图:试样中各组分经色谱柱分离后,在柱的末端收集各组分,经检测器转换为电信号,用纪录仪将各组分浓度记录下来,得到色谱图。
§(色谱图)及有关术语
如图所示为一色谱流出曲线:
色谱流出曲线的意义:
色谱峰数---样品中单组份的最少个数;
色谱保留值——定性依据;
色谱峰高或面积——定量依据;
色谱保留值或区域宽度——色谱柱分离效能评价指标;
色谱峰间距——固定相或流动相选择是否合适的依据
色谱术语
1)基线:在实验条件下,色谱柱后仅有纯流动相进入检测器时的流出曲线称为基线。基线在稳定的条件下应是一条水平的直线。它的平直与否可反应出实验条件的稳定情况。
2)峰高(h)和峰面积:色谱峰顶点与基线的距离叫峰高。色谱峰与峰底基线所围成区域的面积叫峰面积。
3)保留值
(t0):不与固定相作用的物质从进样到出现峰极大值时的时间,它与色谱柱的空隙体积成正比。由于该物质不与固定相作用,因此,其流速与流动相的流速相近。据t0可求出流动相平均流速
:试样从进样到出现峰极大值时的时间。它包括组份随流动相通过柱子的时间t0和组份在固定相中滞留的时间。
’:某组份的保留时间扣除死时间后的保留时间,它是组份在固定相中的滞留时间。即
由于保留时间为色谱定性依据。但同一组份的保留时间与流速有关,因此有时需用保留体积来表示保留值。
:表示相邻两个峰分离程度的优劣,是色谱柱分离效能的指标,
用“R”表示。
定义:相邻两组分色谱峰保留值只差与两组分色谱峰底宽度总和
之半的比值:
R=,%,达到基线分离。
:r=b/a
r=1,峰形为对称的高斯曲线;
r﹥1,峰形拖尾;
r﹤1,峰形前伸。
其他色谱分析方法
液相色谱(LC)包括制备液相色谱
离子色谱(IC)
毛细管电泳(CE)
薄层色谱(TLC)
亲和色谱(AC)
凝胶渗透色谱又称排阻色谱(GPC)
高速逆流色谱
超临界流体色谱(SFC)
全二维气相色谱
多维气相色谱
色谱法主要是用来分析自然界中各种有机物的方法