文档介绍：中国实验诊断学年月第卷第期—一
文章编号:———
干扰抑制人肝癌细胞—基因表达的研究
赵岳,徐凯成,张燕菊,李中辉,刘伟
.吉林大学中日联谊医院,吉林长春;.汪清林业局职工医院,吉林汪清
摘要:目的研究干扰对细胞的—基因表达的干扰效应。方法建立装载靶向—基
因小于扰性的表达载体;用脂质体法将此表达载体转染细胞株,以转染空载细胞作为对照;采
;流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果转染的表达载体可以
。.基因的表达抑制与细胞的凋亡相关联。结论转染—
,并伴有细胞的凋亡。其工作的开展将为治
疗、、新药开发提供研究基础。
关键词:干涉;肝癌;基因
中图分类号:. 文献标识码:
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在肝癌中存在多种原癌基因的激活和抑癌基因公司产品。引物由鼎国公司合成。脂质体
的失活、突变,最终导致其编码蛋白发生质和量的改为产品。培养
变,从而引起细胞恶变。干涉技术已基/美国。丙烯酰胺、、购自.
经成为研究基因功能的一种公认的有效工具,并且;、甘氨酸购自。硝酸纤维素膜
可以用于筛选药物靶点,为治疗肿瘤、病毒感染带来购自。
突破。本文作者将根据有效干涉靶点设计的. 细胞培养人肝癌细胞细胞株由中科
用脂质体法转染人肝癌细胞,通过—和院上海细胞所提供。在含%/牛血清的培
;流式细胞仪检养液中培养,于% 和条件下培养。
测细胞凋亡情况。。
材料与方法. 实验分组工组阳性治疗组:.一
. 材料质粒:—... 转染液;组阳性治疗
..—载体,由武汉晶塞公司构建并提供。组:—..一一转染
为公司产品。—液;组阴性对照组:转染液;
,及为Ⅳ组正常对照组:阳离子脂质体转染
公司产品。,—液。
,各种内切酶,,,均为. 转染细胞采用脂质体—
进行转染。接种细胞。取对数生长期的
通讯作者克隆株细胞用.%胰酶消化后,制成单细
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胞悬液,用细胞记数板进行细胞记数。取孔板水平表达的改变。结果中可看到两条带,上方
个,每组个平行孔。每个培养皿接种细胞数为条带在大约位置,是阳性对照基因
×。做好分组标志。,% 条件下培养的表达,而下方条带在大约位置,
小时后进行转染。转染步骤依据. 因的表达。.条带与条带的比值结
转染说明书。果显示:阳性治疗组Ⅱ的表达量与其他三组比较明
.. 用提取实验组与对照组细胞显减少。—
中的总。总中逆转录出,。详见图、。
法扩增。引物序列:.. . 对转染的细胞蛋白水平
.一—表达的抑制应用检测技术,以
.;引物序列:一基因作为内参照,
一,。因在水平表达的改变。的结果中
. 转染小时后提取细胞总蛋可看到两条带,上方条带在大约位置,是阳性
白用化学发光法显色。对照基因的表达,而下方条带在大约
. 凋亡细胞分析收集转染后