文档介绍：四川大学
博士学位论文
RNA干扰抑制胰腺癌细胞SURVIVIN表达并诱导细胞凋亡的研究
姓名:何满西
申请学位级别:博士
专业:外科学(普外)
指导教师:张肇达
20060401
研究生签名:膨庐钟多年肜月扔日声明与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在本人声明所呈交的学位论文是本人在张肇达导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知,除了文中特别加以标注和致谢的地方外,论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果,也不包含为获得四川大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。论文中作了明确的说明并表示谢意。本学位论文成果是本人在四川大学读书期间在导师指导下取得的,论文成果归四川大学所有,特此声明。导师签名四川大学桩床医学博士专业学位论文’
椰缩略词表碱基对二甲基亚砜脱氧核糖核酸多克隆区分钟聚合酶链反应转录后基因沉默扇秒钟英文缩写続英文全称中文全称互补二氨基联苯氨焦碳酸二乙脂脱氧核苷三磷酸小时凋亡抑制蛋白信使核苷酸磷酸盐缓冲液碘化丙啶核糖核酸每分钟转数逆转录短发夹小干扰生存素透射电镜四川大学临床医学博士学位论文础:—·
扇乓种埔认侔┫赴鸖表达并诱导细胞凋亡的研究论文摘要中文摘要凋亡抑制蛋白基因家族的成员之一,,其患病率在世界范围呈上升趋势,预后极差。目前,随着分子生物学的迅速发展,与胰腺癌有关的新的癌基因,抑癌基因和抗凋亡基因不断被发现和克隆,为胰腺癌发病机制的探讨、诊断和治疗提供了许多新的靶点。其中,基因,作为默。作为一门新的基因阻断技术,近几年来,在肿瘤基因治疗方面的研究取得了重大进展。能用于胰腺癌的治疗吗4耍斜匾W进一步的基础研究.【目的】⑻教忠认侔┫赴關欠裼衧泶铩、从胰腺癌细胞株克隆基因,并对其进行序列测定分析。⒄对基因构建相应的干扰载体一泶镌靥濉、,筛选出高效的干扰载体。⒓觳飧咝Ц扇旁靥迨欠窨梢杂盏家认侔┫赴關凋亡,为以后运用技术治疗胰腺癌奠定一定的理论和实验基础。椒╙⒈狙芯抗郝虿⒋ù嘌认侔┫赴鸓,分别采用技术、免疫细胞化学方法、免疫荧光技术和猙觳庖认侔┫、用—椒ù右认侔┫赴四川大学临床医学博士学位论文
方法、透射电镜、⒘⒂肨克隆方法把基因克隆到靥迳希焖偌ê兔盖屑ㄒ院螅徒还窘行蛄胁舛ǚ析。⒏菀认侔┫赴關中调出的基因序列设计并化学合成两对干扰序列,其两端带有、酶切位点,把干扰序列退火以后克隆到泶镌靥錺的、酶切位点上,并对构建的干扰载体进行酶切和测序鉴定。⒏扇旁靥遄H疽认侔┫赴,并用、免疫荧光技术、猙觳飧扇旁靥宥胰腺癌细胞株表达的抑制情况,从而筛选出高效的干扰载体。汛烁咝У母扇旁靥遄H疽认侔┫赴關,⒚庖呦赴Х椒ê兔庖哂ü≡嘉鞍字识位于细胞浆中,细胞核中未见表达。⒋右认侔┫赴關寺〕了基因,其大小为湫蛄杏隚ú嫉男蛄幸致,无表达异构体存在。⒐菇苏攵詓虻膕表达载体和猻庑蚍⑾衷靥錺—有碱基缺失,而无任何碱基缺失或突变。⒏扇旁靥猻梢愿咝б种苨谋泶铮趍降囊种坡饰%,在蛋白质水平的抑制率为%;而干扰载体猻蘼墼水平还是蛋白质水平都无明显抑制作用。⒏扇旁靥猻既胍认侔┫赴鸓后,用碘化丙啶及染料、透射电镜可以观察到细胞呈现外形不规则,细胞体积缩小,核固缩或呈新月型、染色质断裂、凋亡小体形成等凋亡特征性改变,可以看到转染干扰载体后胰腺癌细胞有阶梯状的鱿帧流式细胞仪检测到干扰载体可以诱导胰腺癌细胞凋亡数明显增加。四川大学临床医学博士学位论文‘
崧邸、在胰腺癌细胞株有较高表达,说明胰腺癌的发生发展中可能有的参与,并且其有可能成为胰腺癌的基因治疗的一个靶点。⒂迷靥灞泶飐的方法可以抑制的表达,其作用时要求序列互补,。⒂:表达下调以后可以促进腺癌细胞的凋亡,说明扇偶际跤糜谝认侔┑幕蛑瘟剖强尚械摹关键词:;籖干扰;凋亡四川大学临床医学博士学位论文
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扇乓种埔认侔┫赴闟表达并诱导细胞凋亡的研究论文正文势,西方国家恶性肿瘤死亡人数中,胰腺癌占第唬磕暌认侔┎∷缆疗效果很差,病死率极高。以手术为主的治疗手段在过去几十年中对预胰腺癌是一种恶性程度较高的肿瘤,.其患病率在世界范围呈上升趋为十万分之九至十,仅次于肺癌、结肠癌和乳腺癌。但与前三位肿瘤相比,