文档介绍：· · 国际生物制品学杂志年月第卷第期, , . , .
· 论著·
不同浓度葡萄糖对细胞生长特性及蛋白
表达的影响
丁军颖张振龙李军赵建英于世荣许雪梅
【摘要】目的研究不同浓度葡萄糖对昆虫细胞生长特性及蛋白表达的影响。方法将对数
生长期的细胞在含不同浓度葡萄糖的无血清培养基—,中培养。采
用台盼蓝拒染法监测细胞密度,分析比较不同浓度葡萄糖对细胞生长特性的影响。然后,将对数生
长期的细胞在含不同浓度葡萄糖的中培养表达人乳头瘤病毒,
型蛋白。以蛋白印迹法鉴定并分析比较不同浓度葡萄糖对细胞表达蛋白的影响。结果
个不同葡萄糖浓度实验组的细胞增殖速率及最大细胞密度均大于不加葡萄糖的对照组。两个较低
葡萄糖浓度组的细胞凋亡率低于对照组,最高葡萄糖浓度组的细胞凋亡率则高于对照组。另外,加葡
萄糖的个实验组的蛋白表达量均高于不加葡萄糖的对照组,其中,个较高葡萄糖浓度组显示有目的
蛋白的降解条带。在另外个没有出现降解条带的实验组中,以培养过程中间补加葡萄糖浓度至
/的实验组蛋白表达量最大。结论葡萄糖可促进细胞增殖,不同浓度葡萄糖对细胞凋亡
的影响不同;适宜浓度的葡萄糖可提高细胞表达完整外源蛋白的量。
【关键词】葡萄糖;昆虫细胞;增殖;蛋白表达

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基金项目:国家高技术研究发展计划
作者单位:北京生物制品研究所中试一室丁军颖、张振龙、李军、赵建英、于世荣;北京协和医
学院基础学院许雪梅
通信作者:张振龙,: .
国际生物制品学杂志年月第卷第期,,.,.
重组杆状病毒一昆虫细胞表达系统因具有多角.. 以添加不同浓度葡萄糖的培
体蛋白基因启动子控制下的高效表达,比较完善的养病毒攻击后的细胞收获对数生长期的
转译后加工修饰,易于纯化,无内毒素污染等优势细胞,以新鲜调整细胞密度至
而备受关注。本课题组已采用此表达系统生产外×。/。按感染复数值为加入相应体积的含
源性人乳头瘤病毒, 基因的重组杆状病毒,然后,将此混悬液
型蛋白。在此表达系统中,昆虫细胞的生长平均分为组,每组。组以培
特性及蛋白表达效率是直接影响蛋白产量的关键养,为对照组;、、和组依次以含、、
因素,为此,在本实验中,我们对于向培养基中添加和/葡萄糖的培养。上述
葡萄糖能否改善昆虫细胞的生长特性以及提高组细胞均在、/条件下培养,收获
外源蛋白的表达效率进行了初步探索,以期为高效细胞。、、和组细胞则在中
率中试生产提供实验依据。培养到时,依次分别向培养基中添加葡萄糖至
材料与方法、、和/,再继续培养,收获细胞。
. 材料各组细胞于一℃冻存备检。
.. 试剂无血清培养基—.. 蛋白印迹法鉴定比较各组表达的
,是美国公司产品,细胞是蛋白以上述各组等体积细胞悬液获得的细胞沉一一/【× 黼掣再烬
美国公司产品,葡萄糖是北京化工厂产淀为样本,以抗鼠单克隆抗体为一抗,辣
品,含基因的杆状病毒由北京协和医学根过氧物酶标记的羊抗鼠多克隆抗体为二抗,用四
院基础学院许雪