文档介绍：该【生物化学实验习题及参考答案 】是由【飞行的笑笑】上传分享，文档一共【5】页，该文档可以免费在线阅读，需要了解更多关于【生物化学实验习题及参考答案 】的内容，可以使用淘豆网的站内搜索功能，选择自己适合的文档，以下文字是截取该文章内的部分文字，如需要获得完整电子版，请下载此文档到您的设备，方便您编辑和打印。生物化学实验****题及解答
一、名词解说
1、pI;2、层析;3、透析;4、SDS-聚丙烯酰氨凝胶电泳;5、蛋白质变性;6、复性;7、Tm值;8、同工
酶;9、Km值;10、DNA变性;11、退火;12、添色效应
二、基础理论单项选择题
1、用以下方法测定蛋白质含量,哪一种方法需要完好的肽键?()
A、双缩脲反响
B、凯氏定氮
C、紫外汲取
D、羧肽酶法
2、以下哪组反响是错误的?
A、葡萄糖——Molish
C、色氨酸——坂口(
()
反响B、胆固醇——Libermann-Burchard
Sakaguchi)反响D、氨基酸——茚三***反响
反响
3、Sanger
试剂是(
)
、苯异硫***酸B、2,4-二硝基***苯C、丹磺酰***D、-巯基乙醇
4、肽键在以下哪个波长拥有最大光汲取?()
A、215nmB、260nmC、280nmD、340nm
5、以下蛋白质组分中,哪一种在280nm拥有最大的光汲取?()
A、色氨酸的吲哚基
B、酪氨酸的酚环
C、苯丙氨酸的苯环
D、半胱氨酸的硫原子
6、SDS凝胶电泳测定蛋白质的相对分子量是依据各样蛋白质(
)
A、在必定
pH值条件下所带的净电荷的不同
B、分子大小不同
C、分子极性不同D、溶解度不同
7、蛋白质用硫酸铵积淀后,可采用透析法除掉硫酸铵。硫酸铵能否从透析袋中除净,你采用以下哪一种试剂
检查?()
A、茚三***试剂
B、奈氏试剂
C、双缩脲试剂
D、Folin-
酚试剂
8、蛋白质变性是因为(
)
A、一级构造改变
B、亚基解聚
C、空间构象损坏
D、辅基零落
9、用生牛奶或生蛋清挽救重金属盐中毒是依照蛋白质拥有(
)
A、胶体性
B、粘性
C、变性作用
?
D、积淀作用
?
10、相关变性的错误描绘为(
)
A、蛋白质变性后,其一级构造和空间构造改变
加热、紫外线照耀、超声波等能够惹起蛋白质变性
B、蛋白质变性后,其理化性质和生物学活性改变D、变性蛋白质粘度增添,易被酶水解,易积淀
C、
11、双链DNA热变性后()
A、黏度降落B、沉降系数降落
C、浮力密度降落
D、紫外汲取降落
12、酶的活化和去活化循环中,酶的磷酸化和去磷酸化位点往常在酶的哪一种氨基酸残基上?(
)
A、天冬氨酸
B、脯氨酸
C、赖氨酸
D、丝氨酸
13、在生理条件下,以下哪一种基团既能够作为
H+的受体,也能够作为
H+的供体?(
)
A、His
的咪唑基
B、Arg
的胍基
C、Cys的巯基
D、Trp
的吲哚基
三、填空
1、脯氨酸和羟脯氨酸与茚三***反响产生()色物质,而其余氨基酸与茚三***产生(
2、往常可用紫外分光光度法测定蛋白质的含量,这是因为蛋白质分子中的()、(
)色的物质。
)、()三种氨
基酸的共轭双键有紫外汲取能力。
3、移液枪在每次实验后应将刻度调至(),让弹簧答还原型以延伸移液枪的使用寿命,并禁止汲取()。
4、使用离心计时,若有噪音或机身振动时,应立刻(),而且离心管须对称放入套管中,防备机身振动,
若只有一支样品管,则此外一支要用()取代。
5、测定蛋白质浓度的方法主要有(
)、(
)、(
)。
6、利用蛋白质不可以经过半透膜的特征,使它和其余小分子物质分开的方法有(
)和(
)等。
7、核酸在260nm邻近有强汲取,这是因为(
)。
8、双键DNA热变性后,或在
pH2以下,或在
pH12以上时,其OD260(
),相同条件下,单键
DNA的OD260
(
)。
9、***纤维素膜可联合(
)链核酸。将RNA变性后转移到***纤维素膜上再进行杂交,称(
)印迹法。
10、常用二苯***法测定(
)含量,用苔黑酚法测定(
)含量。
11、变性DNA的复性与很多要素相关,包含(
)、(
)、(
)、(
)、(
)。
12、温度对酶活力影响有以下双方面:一方面(
),另一方面(
)。
13、维生素C是()酶的辅酶,此外还拥有(
)作用。
14、在分光光度计的使用或检定中,
()的正确度是权衡仪器工作性能的一项重要指标,它的正确程度直接
关系到所测数据的可信性及科学性。(
)的偏差越大,测试结果的可信性越差
,进而影响到测试数据的正确
性。
四、问答
1、紫外分光光度法测定核酸含量的原理。
2、蛋白质变性与积淀的关系。
3、牛乳中制备酪蛋白的原理和方法。
4、试述凝胶成像系统操作时应注意的事项。
5、若样品中含有蛋白质和核苷酸等杂质,怎样清除扰乱?
6、体液血糖测定有哪些方法?
7、DNA在电场中的迁徙率取决于哪些要素?
8、琼脂糖凝胶有哪些注意事项?
9、考马斯亮蓝G-250法测定蛋白质含量的原理是什么?
10、何谓Rf值?影响Rf值的主要要素是什么?
11、蛋白质分别和纯化的一般方法?
12、怎样正确选择核酸电泳指示剂?
参照答案
一、名词解说
1、指氨基酸的正离子浓度和负离子浓度相等时的pH值,用符号pI表示。
2、依照在挪动相和固定相(能够是气体或液体)之间的分派比率将混淆成分分开的技术。
3、经过小分子经过半透膜扩散到水(或缓冲液)的原理,将小分子与生物大分子分开的一种分别纯化技术。
4、在去污剂十二烷基硫酸钠存在下的聚丙烯酰氨凝胶电泳。SDS-PAGE不过依照分子的大小,而不是依据分
子所带的电荷大小分别的。
5、生物大分子的天然构象遇到损坏致使其生物活性丧失的现象。蛋白质在遇到光照,热,有机溶济以及一些
变性济的作用时,次级键遇到损坏,致使天然构象的损坏,使蛋白质的生物活性丧失。
6、在必定的条件下,变性的生物大分子恢复成拥有生物活性的天然构象的现象。
7、核酸分子变性过程中,紫外汲取达到最大增量一半时的溶解温度。
8、能催发相同的反响种类但其理化性质及免疫学性质不同的酶。
9、反响速度为最大反响速度一半时的底物浓度。是酶的特点物理学常数之一。近似表示酶与底物的亲和力。
10、DNA
双链解链,分别成两条单链的现象。
11、既
DNA
由单链复性、变为双链构造的过程。根源相同的
DNA
单链经退火后完好恢复双链构造的过程,
同源
DNA
之间`DNA
和
RNA
之间,退火后形成杂交分子。
12、当双螺旋DNA溶化(解链)时,260nm处紫外汲取增添的现象。
二、基础理论单项选择题
1、A;2、C;3、B;4、A;5、A;6、B;7、B;8、C;9、D;10、A;11、A;12、D;13、A;
三、填空
1、黄、紫
2、Trp、Tyr、phe
3、最大、强挥发性、强腐化性的液体。
4、切断电源,即时清除故障;等质量的水
5、双缩脲法、Folin-酚试剂法、凯氏定氮法
6、透析、超滤
7、在嘌呤碱基和嘧啶碱基中存在共轭双键
8、增添、不变
9、单、Northern
10、DNA、RNA
11、样品的均一度、DNA的浓度、DN***段的大小、温度的影响、溶液的离子强度
12、温度高升,可使反响速度加速;温度太高,会使酶蛋白变性而失活
13、羟化、解毒
14、透射比或吸光度、透射比或吸光度
四、问答
1、答:
核酸、核苷酸及其衍生物都拥有共轭双键系统,能汲取紫外光,
RNA
和
DNA
的紫外汲取峰在
260nm
波
优点。一般在
260nm
波长下,每
1ml
含1μgRNA
溶液的光汲取值为
~
,每
1m1
含1μgDNA
溶液的光汲取值约为
,故测定未知浓度
RNA
或
DNA
溶液在
260nm
的光汲取值即可计算出此中核
酸的含量。此法操作简易,快速。若样品内混淆有大批的核苷酸或蛋白质等能汲取紫外光的物质,则测光偏差较大,故应想法预先除掉。
2、答:
积淀能够是由蛋白质变性进而产生积淀,也能够是因为盐析。蛋白质变性是指光照,热,有机溶济以
及一些变性剂(如重金属盐)的作用时蛋白质的空间构造被损坏,使得蛋白质丧失活性,该过程不行逆。盐析是指向蛋白质的溶液中加入轻金属盐,使得蛋白质积淀析出,这是因为加入盐降低了蛋白质得溶解
度而析出,该过程可逆,加水蛋白质又会溶解。两者实质上是不同的。
3、答:
牛奶含有半乳糖、蛋白质、脂肪成分。蛋白质中的酪蛋白经过等电点积淀,再经过离心而获取,糖类小分子因为处于清夜中而分别,积淀物中所含有的脂肪经过有机溶剂抽提而去除,最后获取纯白色、晶状酪蛋白。
方法:取新鲜牛乳,用酸碱调PH到酪蛋白的等电点积淀析出酪蛋白,而后清洗,醇醚吸水至干燥得粉
末称重,计算提取率。步骤:保温→调PH→积淀→离心→清洗→干燥→称量
4、答:
1)紫外凝胶照相时要防备EB污染仪器,在紫外透射灯样品台上垫上蓝色和白色胶片,开关凝胶成像系统前面板那、操作GeneSnap软件之时都不可以够戴手套。白光透射光源搁置在紫外透射光源上边时要把蓝色和白色胶片拿出。
2)注意开机次序,先开凝胶成像系统,再翻开电脑进入GeneSnap软件。
3)在使用紫外光源照相的过程中,不可以够翻开凝胶成像系统前面板。
5、答:
用去垢剂(如SDS,十二烷基磺酸钠)使蛋白质变性,RNA经过RNase消化消除。
6、答:
测定血糖的方法常用的有三种:静脉血浆葡萄糖(VPG),毛细血管全血葡萄糖(CBG)和静脉全血葡萄
糖(VBG)。
7、答:
1)
DNA
的分子大小及构型:
?8^不同构型
DNA
的挪动速度序次为:供价闭环
DNA
(covalentlyclosed
circular,cccDNA
)>直线
DNA>
开环的双链环状
DNA
。2)琼脂糖浓度:一个给定大小的线状
DNA
分子,
其迁徙速度在不同浓度的琼脂糖凝胶中各不相同。
DNA
电泳迁徙率的对数与凝胶浓度成线性关系。凝胶
浓度的选择取决于
DNA
分子的大小。
3)DNA
分子的构象
:当
DNA
分子处于不同构象时
,它在电场中移
动距离不单和分子量相关
,还和它自己构象相关。相同分子量的线状、开环和超螺旋
DNA
在琼脂糖凝胶中
挪动速度是不相同的
,超螺旋
DNA
挪动最快
,而线状双链
DNA
挪动最慢。
"4)电源电压
:琼脂糖凝胶分别
大分子
DNA
实验条件的研究结果表示,在低浓度、低电压下,分别成效较好。
5)嵌入染料的存在
:荧
光染料溴化乙啶用于检测琼脂糖凝胶中的DNA,染料会嵌入到聚积的碱基对之间并拉长线状和带缺口的环
状DNA,使其刚性更强,还会使线状DNA迁徙率降低15%。
6)离子强度影响:电泳缓冲液的构成及其离子强度影响DNA的电泳迁徙率。
8、答:
1)缓冲液的使用要正确,长时间高压电泳时,常更新缓冲液或在两槽间进行缓冲液的循环是可取的。2)
琼脂糖的影响。
3)凝胶中所加缓冲液应与电泳槽中的相一致。
4)样品加入量的多少。
5)电泳系统的变化
会影响
DNA
的迁徙,加入
DNA
标准参照物进行判断是必需的。
6)DNA
样品中的盐浓度也影响
DNA
的
迁徙率。7)DNA迁徙率取决于琼脂糖凝胶的浓度、迁徙分子的形状及大小。
9、答:
考马斯亮蓝G-250(CoomassiebrilliantblueG-250)染料,在游离状态下溶液呈棕红色,当它与蛋白质联合
后变为蓝色。蛋白质含量在0~1000μg范围内,蛋白质-色素联合物在595nm下的吸光度与蛋白质含量成
正比,故可用比色法进行定量剖析。考马斯亮蓝G-250法(Bradford法)是比色法与色素法相联合的复合
方法,简易快捷,敏捷度高,稳固性好,是一种较好的蛋白质常用剖析方法。
10、答:
Rf为氨基酸的比移值。
影响纸层析迁徙率Rf值的主要要素:1、样品自己的性质和构造;2、溶剂的性质;3、PH值;4、温度;
5、滤纸性质。
11、答:
主要有以下一些方法:透析及超滤法;***积淀、盐析及免疫积淀;电泳;层析;超速离心。
12、答:
核酸电泳常用的指示剂有溴酚兰和二甲苯青及银染色。溴酚兰在碱性液体中呈紫兰色,在
%、1%、
%和2%琼脂糖凝胶电泳中,溴酚兰的迁徙率分别与
1Kb、
、
的双链线性
DNA
片
段大概相同
.二甲苯青的水溶液呈兰色,它在
1%%琼脂糖中电泳时,其迁徙速率分别与
2Kb
的双链线性
DNA
大概相像。
染色剂:核酸电泳后,需经染色后才能展现出带型,最常用的是溴化乙锭染色法,其次是银染色。