文档介绍：HIV-1 P24抗原检测方法研究进展
关键词:HIV-1 P24抗原;酶免疫测定法;检测方法
今年是世界艾滋病流行以来的第33个年头,全球艾滋病流行与防治形势都发生了巨大的变化。自上世纪九十年代中期高效联合抗逆转录病毒治疗(highly active antiretroviral therapy,HAART)技术应用以来,成千上万的艾滋病病人得到有效治疗。然而,由于HIV本身的高变异率,导致临床上尚无有效的根除HIV的治疗方法。因此,对艾滋病的防控手段仍以预防为主。目前,对HIV感染的检测方法包括抗体检测、P24抗原检测、核酸检测以及CD4+T淋巴细胞水平检测等。由于从感染HIV到出现可检测的抗体尚有一段时间,因此虽然抗-HIV检测的ELISA试剂经历了4代发展[1],但其“窗口期”问题仍不可避免;而可以进一步缩短“窗口期”问题的核酸检测和CD4+T淋巴细胞水平检测,由于其检测过程较复杂、耗时较长且需要特殊仪器而不易普及。
HIV-1侵入人体后,核心抗原P24的水平随着病毒RNA水平的发展而发展,并在急性感染期即可出现,通常被认为是病毒复制的间接标志,与病情发展密切相关。因此,血液及其他体液标本中P24抗原的检测可以缩短窗口期,有助于HIV-1的早期诊断、预后判断及评价抗病毒治疗的效果,具有良好的实际应用价值。
1 P24抗原的生物学特性
HIV属于逆转录病毒科慢病毒属中的人类慢病毒组,为直径约100-120nm的球形颗粒,由核心和包膜两部分组成。核心包括两条单股RNA
链、核心结构蛋白和病毒复制所必须的酶类,包括逆转录酶(RT,P51/P66),整合酶(INT,P32)和蛋白酶(PI,P10).核心外面为病毒衣壳蛋白(P24,P17).病毒的最外层为包膜,其中嵌有gp120(外膜糖蛋白)和gp41(跨膜糖蛋白)两种糖蛋白。,含有3个结构基因(gag,pol和env)、2个调节基因(tat反式激活因子、rev毒粒蛋白表达调节因子)和4个辅助基因(nef负调控因子、vpr病毒r蛋白、vpu病毒u蛋白和vif毒粒感染性因子)。HIV变异性很强,各基因的变异程度各不同。其中以env基因的变异率最高,gag和pol基因相对保守。Gag基因编码55kd的前体蛋白,在pol基因编码的蛋白酶的加工下产生P17、P24和P55蛋白,因此P24蛋白氨基酸顺序高度保守,这使其在HIV-1感染的检测中显示良好的规律性。
2 P24抗原的检测方法
ELISA检测P24抗原目前,商品化的P24抗原检测试剂盒都是依据夹心Elisa。首先以P24单克隆抗体包被微孔板,加人待检标本孵育,待检标本中若存在P24抗原,则被“捕捉”结合于包被抗体,、链亲合素化的辣根过氧化物酶和反应底物显色,最后用酶联免疫检测仪测定OD值判断结果。标准P24抗原检测方法的阳性检出率相对较低,在无
症状携带者中通常仅为8%一10%,在艾滋病相关综合征
(AIDS-plex,ARC)患者中为12%,在AIDS患者中为37%一86%。这种低检出率可能与感染早期P24核心抗原量较少,以及在病情发展阶段P24抗原与抗体形成抗原抗体复合物阻碍了抗原的检测有关。改进标准的方法或设计新方法,可以增强检测