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骨髓涂片细胞学检查与流式细胞免疫分型检测结果不相符分析
摘要:目的探讨骨髓涂片细胞学检查与流式细胞免疫分型检测结果不相符状况并分析两种检测方法对于造血系统疾病的诊断价值。方法回顾性分析2019年3月至2020年3月由四川高校华西医院试验医学科接收且具有骨髓涂片细胞学检查及流式细胞免疫分型检测结果的疑诊血液病患者5373例作为争论对象,并对两种方法检测结果不相符的病例状况进行分析。结果5373例患者中骨髓涂片细胞学检查与流式细胞免疫分型检测结果总不相符的病例共352例(%)。争论对象中骨髓涂片细胞学检查结果为增生性贫血而流式细胞免疫分型检测结果为特殊浆细胞和特殊B淋巴细胞病例共2例。结论骨髓涂片细胞学检查对于细胞形态典型者识别度较高,流式细胞免疫分型检测对于缺乏特定形态的特殊细胞识别度较高,且在特殊细胞较少的样本与预后检测方面优于骨髓涂片细胞学检查。
关键词:白血病;骨髓涂片细胞学;流式细胞免疫分型;
Analysisoftheinconsistencebetweentheresultsofbonemarrow
cytomorphologyand
flowcytometricimmunotyping
JINYongmeiLIUYuhanLIAOHongyanJIANGNenggang
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DepartmentofMedicalLaboratory,WestChinaHospital,SichuanUniversityChengdu
Abstract:
ObjectiveToexplorethereasonsfortheinconsistentresultsofbonemarrowsmearcytologyandflowcytometricimmunotyping,,WestChinaHospital,SichuanUniversityfromMarch2019toMarch2020withtheresultsofbonemarrowsmearcytologyandflowcytometricimmunotypingwereretrospectivelyanalyzed,(%).
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Keyword:
leukemia;bonemarrowsmearcytology;flowcytometricimmunotyping;
白血病是造血系统的一种恶性疾病,在我国各年龄段恶性肿瘤的病死率较高,35岁以下人群病死率占据首位[1]。由于白血病是累及造血干细胞的特殊克隆性病变,具有高度异质性,传统的法、美、英分型系统(即FAB分型系统)的形态学分型是一种诊断白血病分型的重要方法。随着科学技术的进展进步,应用形态学、免疫学、细胞遗传学、分子生物学方法对白血病进行分型,提高了对其诊断效率,在白血病疗效观看和预后监测方面也具有重要的临床意义[2]。骨髓涂片细胞学检查虽然误诊率、漏诊率较高,但其对于具有典型细胞特征的疾病有着较好的识别度。本文旨在通过对5373例疑诊血液病患者骨髓涂片细胞学检查与流式细胞免疫分型检测结果不相符的缘由进行回顾性分析,以达到提高二者的全都率、改进检验服务质量的目的。
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1资料与方法
选取2019年3月至2020年3月由本科接收且具有骨髓涂片细胞学检查及流式细胞免疫分型检测结果的疑诊血液病患者5373例作为争论对象。全部争论对象诊断结果由试验室信息系统导出,且均为本院依据形态学、细胞组化、细胞免疫学、分子遗传学等方法确诊的门诊或住院患者。
争论对象俯卧位取髂后上棘,。,混匀后进行流式细胞免疫分型检测。
流式细胞仪使用美国BD公司的产品,型号为FACSCantoⅡ。仪器使用的鞘液、破膜剂、溶血剂及单克隆抗体均由美国BD公司供应。
骨髓涂片加瑞氏姬姆萨混合染液3~5滴,掩盖骨髓膜整体,稍等20s后加缓冲液6~8滴混匀,染色时间为15~20min,用流淌的水从玻片的一侧冲洗染液,待其自然干燥或者用吸水纸吸干后镜检。(1)低倍镜:观看材料、涂层、染色是否合格,依据镜下骨髓渣旁造血组织、脂肪组织的比例推断有核细胞增生状况。首先观看巨核细胞的数量及骨髓涂片边缘和尾部是否有大的或多个特殊的病理细胞。(2)使用油镜分类200个有核细胞(不包括有丝分裂的细胞和裂开的细胞)。依据各种细胞的类型和发育阶段的记录,计算其百分率,并仔细观看各个系、各个阶段的细胞形态是否处于正常。依据有核细胞增生程度和白血病细胞所占比例,通过世界卫生组织(WHO)形态学分型标准对细胞形态进行分析。
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接受SSC/CD45设门和若干个带荧光标记的单克隆抗体检测患者骨髓细胞的抗原表达。阳性推断标准:对一般细胞膜抗原阳性细胞20%为阳性,对CD34和胞浆抗原10%为阳性。确定细胞类型参照欧洲白血病免疫学分型争论组制定的积分系统,计算各个抗原的细胞系列积分并进行推断。
2结果
争论对象中骨髓涂片细胞学检查与流式细胞免疫分型检测结果总不相符的病例共352例(%),其中包括急性白血病病例、检出特殊细胞病例、其他病例。
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争论对象中骨髓涂片细胞学检查与流式细胞免疫分型检测结果不相符的急性白血病病例共32例,包括24例急性髓系白血病(AML)病例,8例急性淋巴细胞白血病(ALL)病例。见表1。
表1检测结果不相符的急性白血病病例状况
争论对象中骨髓涂片细胞学检查与流式细胞免疫分型检测结果不相符的特殊细胞病例共318例,%。其中骨髓涂片细胞学检查结果为特殊浆细胞,而流式细胞免疫分型检测结果为特殊B淋巴细胞、特殊T淋巴细胞、淋巴细胞增殖性疾病(LPD)、未见特殊的病例共14例;骨髓涂片细胞学检查结果为未见特殊,而流式细胞免疫分型检测结果为特殊原始粒细胞、特殊B淋巴细胞、特殊T淋巴细胞、特殊浆细胞、特殊单核细胞、特殊自然杀伤细胞(NK细胞)、LPD病例共216例;骨髓涂片细胞学检查结果为其他特殊,流式细胞免疫分型检测结果为未查见特殊表型细胞病例共88例。见表2。
争论对象中骨髓涂片细胞学检查结果为增生性贫血而流式细胞免疫分型检测结果为特殊浆细胞和特殊B淋巴细胞病例共2例。
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表2两种方法检测结果不相符的特殊细胞病例状况
3讨论
骨髓涂片细胞学检查是一种检查血液疾病及多种疑难杂症的重要手段,同时也是多种疾病预后、骨髓造血功能恢复效果的重要推断指标之一[3]。它能够通过简易的工具制片,再由显微镜人工观看骨髓细胞的形态、数量、分类、比例,从而得出相应诊断,该检查方法以细胞形态为分型依据[4,5]。在实际的临床工作中,骨髓涂片细胞学检查结果易受到多种因素的影响,导致结果消逝明显差异,加之各试验室的结果缺乏认同性,简洁造成对疾病的漏诊、误诊[6,7]。随着流式细胞免疫分型检测应用于临床,其对于白血病的诊断起到了重要作用。它能够快速地对细胞及亚细胞的构造进行检测,能够更好地认知健康状态下的造血系统,并能对具有明确免疫表型特点的血液恶性疾病进行描述。流式细胞免疫分型检测的优点主要为检测速度快、测量指标多、灵敏度高等,提高了特殊细胞计数精确性、精密度且能报告多项争论参数[8,9]。白血病细胞分为B淋巴细胞系、T淋巴细胞系、髓细胞系及红细胞系和巨核细胞系,每种细胞系所表达抗原的不同是区分白血病细胞的关键[10,11]。这些免疫标志物能够反映正常细胞在变为恶性肿瘤过程中细胞基因及抗原标志所发生的变化,而这种微小变化在显微镜下无法进行有效辨别。尤其是当骨髓涂片细胞学检查对特殊细胞难以区分时,各种血液肿瘤的诊断、鉴别诊断就主要依靠于流式细胞免疫分型检测。
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争论对象中骨髓涂片细胞学检查与流式细胞免疫分型检测结果不相符的AML病例共24例,其不相符缘由主要体现在白血病细胞的形态识别,尤其是在有单核细胞成分的AML-M4/M5中。流式细胞免疫分型通过对特异性的荧光抗体进行检测,直指白血病细胞本质,能够更好地对是否有单核细胞进行判定,此种状况下建议骨髓涂片细胞学结合流式细胞免疫分型检测结果进行分析。对于混合细胞型白血病来说,其发生率极低,由于是跨系别混合,细胞来源混乱,不能仅依靠骨髓涂片细胞学检查进行分型,而是需要流式细胞免疫分型检测对其进行诊断,同时还需要结合分子遗传学检测。建议骨髓涂片细胞学检查不能明确区分系列的急性白血病病例,应参考流式细胞检测结果进行分型。ALL的白血病细胞个体差异极大,仅凭肉眼难以区分T/B淋巴细胞,亦不能对细胞划分发育阶段。骨髓涂片细胞学检查报告为ALL,临床仍需要流式细胞免疫分型检测结果进一步分型。
对于特殊细胞的检测,骨髓涂片细胞学检查与流式细胞免疫分型检测各有优缺点。骨髓涂片细胞学检查观看的视野有限,检测限较低,但对于寄生虫、病原菌及海蓝细胞等形态上明显有别于正常细胞的特殊细胞具有优势。流式细胞免疫分型检测限可以达到10-4,甚至更高,但流式细胞免疫分型检测对特殊细胞的判定一般只基于细胞表型,对标本质量要求较高,同时也会受到荧光抗体种类及数量的制约。唯有将两种检测方法结合起来考虑才能进一步提高特殊细胞的检出率。
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总之,流式细胞免疫分型检测特殊细胞既快速且高效,若同时再联合骨髓涂片细胞学检查,可避开由于表面膜抗原标记缺乏或特殊细胞在治疗过程中某些标志丢失或转变,或骨髓标本采集时过度稀释等造成流式细胞免疫分型检测结果的假阴性,进一步提高特殊细胞检出率,在疾病的疗效评估及预后监测中都具有重要意义[12]。流式细胞免疫分型检测由于其广泛的适用性和快速出检测结果,是微小残留病灶检测的首选方法[13,14,15]。虽然流式细胞免疫分型检测优点突出,但是骨髓涂片细胞学检查照旧不行抛弃。如何提高骨髓涂片细胞学检查精确性、诊断符合率便是当下需要着重探讨的问题,后期将进一步深化争论。
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