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JournalofHainanMedicalUniversity737
DOI:.
网络出版地址:.
针刺结合蹊径通脉汤对心肌梗死大鼠ATP敏感性钾离子通道相关蛋
、
荐坤,李兰石,王颖
(辽宁中医药大学针灸推拿学院,辽宁沈阳110847)
[摘要]目的:以“针药结合对心肌梗死(MI)、
的影响”为研究目的,研究针药结合对心肌梗死改善的可能机制,为实现研发心肌梗死新治疗手段提供实验
数据基础。方法:65只健康雄性SD大鼠,随机选择10只作为对照组。其余大鼠饲以高脂肪食物,共3周,对
照组大鼠皮下多点注射生理盐水,其余大鼠按相同方式注射盐酸异丙肾上腺素。通过心电图对比,将造模
成功的40只MI大鼠随机分为模型组、针刺组、西药组、针药结合组,每组10只。分别给予相应治疗后,观察
各组大鼠心电图变化,用HE染色观察大鼠心肌细胞的病理改变,以Westernblot检测技术检测ATP敏感性
钾离子通道(、)蛋白的表达量。结果:与对照组相比,实验组的40份实验标本在心肌细胞蛋白
(、)的表达量上都有所提高,差异具有统计学意义(P<)。治疗后,与模型组相比,西药组、
针刺组、、,其中针药结合组下降程度最明
显,差异具有统计学意义(P<)。针刺组和西药组的下降程度不大,差异无统计学意义(P>)。结
论:针药结合对改善心肌梗死大鼠疗效显著,可能与大鼠心肌细胞中ATP敏感性钾离子通道相关蛋白
、。
[关键词]针药结合;心肌梗死;ATP敏感性钾子通道;;
[中图分类号][文献标识码]A[文章编号]1007-1237(2022)10-0737-05
EffectsofacupuncturecombinedwithKaijingtongmaiDecoctiononATPsensitive
JIANKun,LILan⁃‐‑shi,WANGYing
(CollegeofAcupunctureandMassage,LiaoningUniversityofTraditionalChineseMedicine,Shenyang110847,China)
[FoundationProject]:ThisworkissupportedbytheKeyProjectofLiaoningProvincialScienceandTechnologyFoundation
(20180530079)
[Author]:JIANKun,E‑⁃mail:******@.
[Correspondenceto]:WANGYing,Professor,PostgraduateSupervisor,E‑⁃mail:******@.
Received:2021‑⁃10‑⁃11Revised:2021‑⁃11‑⁃05JHMU,2022;28(10):737⁃‐‑741
Viewfromspecialist:Itiscreative,andofcertainscientificandeducationalvalue.
[ABSTRACT]Objective:TostudytheeffectofacupunctureanddrugcombinationontheexpressionofATP-sensitivepotassi⁃‐‑
umionchannel-,toexplorethepossiblemechanismofacupunc⁃‐‑
tureanddrugcombinationontheimprovementofmyocardialinfarction,andtoprovideexperimentaldatabasisforthedevelop⁃‐‑
:Sixty-fivehealthymaleSDratswererandomlyselectedascon⁃‐‑
-
pointsofnormalsaline,
comparison,40MIratssuccessfullymodeledwererandomlydividedintomodelgroup,acupuncturegroup,Westernmedicine
groupandacupunctureanddrugcombinationgroup,,ecgchangesofrats
[基金项目]辽宁省科学技术基金计划重点项目(20180530079)
[作者简介]荐坤,E-mail:******@。
[通讯作者]王颖,教授,硕士研究生导师,E-mail:******@。
[收稿日期]2021-10-11[修回日期]2021-11-05网络出版时间:2021-11-0815:30:08
ineachgroupwereobserved,pathologicalchangesofcardiacmyocyteswereobservedbyHEstaining,andproteinexpressionlev⁃‐‑
elsofATPsensitivepotassiumchannels():Comparedwiththecontrol
group,theproteinexpressionlevelofmyocardialcellsin40experimentalspecimensintheexperimentalgroupwasincreased,
whichhadexperimentalvalue(P<).Aftertreatment,comparedwithmodelgroup,
,acupuncturegroupandacupunctureanddrugcombinationgroupshowed
adownwardtrend,andthedecreasedegreeofacupunctureanddrugcombinationgroupwasthemostobvious,whichhadexperi⁃‐‑
mentalvalue(P<).Therewasnosignificantdecreaseinacupuncturegroupandwesternmedicinegroup(P>).Conclu⁃
sion:Combinationofacupunctureanddrughassignificanteffectonimprovingmyocardialinfarctioninrats,whichmayberelated
.
[KEYWORDS]CombinationofacupunctureandtraditionalChinesemedicine;Miocardialinfarction;ATPsensitivepotassium
channel;;
急性心肌梗死(AMI)是基于冠脉粥样硬化,由J20171021);单***异山梨酯(Lu-nan,国药准字
冠状动脉急性缺血、缺氧导致的心肌坏死性疾病[1]。H10940039)。高脂饲料[科澳协力,许可证号:
心肌细胞的急性缺血缺氧是AMI发生发展的机制,SCXK(京)2019-0001]。自拟蹊径通脉汤由蜈蚣、
因此,能有效遏制心肌细胞发生急性缺血缺氧是治牛膝、茯苓、水蛭、土鳖虫、降香、白僵蚕、丹参、石菖
疗的中心。ATP敏感性钾离子通道(ATPsensitive蒲、麦冬、甘草、川芎、当归组成,来源于辽宁中医药
potassiumchannelKATP
,ATP通道)是被浓度影响大学附属第一医院并由其制成汤剂。冷藏保存。
的内向整流钾通道[2],被称作是心肌缺血、缺氧缺血生物机能实验系统(泰盟科技,BL-420S);
再灌注损伤及缺血预适应的终末段效应通道,现已6805-D型电针仪(汕头市医用设备有限公司);华佗
[3]×25mm
经成为保护心肌细胞相关研究的新方向。ATP通牌针灸针(规格)(苏州医疗用品
道是由内向整流钾通道亚基()和磺酰厂有限公司);−80℃超低温冰箱(日本SANYO电
脲类受体亚基(SUR1/SUR2)两个部分构成的,器集团);EPS600电泳仪(Tanon);低温离心机
,SUR1/SUR2从(JouanSA);多功能酶标仪(TECAN);超微量核酸
KBiodrop
旁起调节作用。ATP通道在生理情况下处于关闭状蛋白分析仪()等。
态,而当发生缺血或坏死时,会经刺激活化开放,
IK15g/3
达量大大增加,加强了ATP电流的密度,介导了对对照组大鼠采用普通饲料(只)喂养周,
心肌的保护[4]。其余大鼠饲以等量高脂肪食物3周。饮水不限,3周
在前期的相关领域,针刺内关穴对瞬时外向钾后描记心电图。对照组的大鼠进行皮下多点位注
离子通道和内向整流钾离子通道相关蛋白的调节射生理盐水(85mg/kg),其他各组大鼠以相同方法
作用已经被证实[5,6],本实验将进一步探讨针药结合进行注射相对等量盐酸异丙肾上腺素(85mg/kg),
对大鼠ATP通道相关蛋白(、)表间隔注射次,共计次,描记心电图。当心电
达的影响,为临床治疗心肌梗死提供实验依据。图出现R波下移、ST段抬高、病理性Q波、QRS波
1材料与方法增宽等其他心律失常现象时则可认为造模成功[7]。
健康雄性SD大鼠65只,购自辽宁长生生物科针药结合组针刺内关、心俞、足三里穴每日1
技有限公司[许可证号:SYXK(辽)2013-0009],体次,·kg-1·d-1,每日1次;针刺
质量(200±20)g,实验操作中遵守实验动物伦理规组针刺相同腧穴每日1次;西药组每日灌服阿司匹
范,伦理批号:21000092018010,、单***;对
23~25℃、相对湿度45%~55%的同等条件动物饲照组和模型组均每日灌服等量生理盐水每日1次。
养房下适应性喂养1周后,随机取10只SD大鼠作所用腧穴均根据《实验针灸学》[8]中大鼠针灸定位方
空白对照组,其余大鼠经MI诱导成心肌梗死模型,法进行定位,×
将造模成功的40只存活大鼠,随机等分为4组,包“华佗牌”针灸毫针,顺经斜刺入各组穴位皮下2
括模型组、针刺组、西药组、针药结合组。mm。接6805-D型电针仪施以疏密波,频率为2~
,以大鼠四肢出现轻微震颤为度,留针15min。
水合***醛(索莱公司T8590);盐酸异丙肾上腺依据《实验动物学》确定大鼠每次灌胃剂量,参照公
素(美国SIGMA公司);生理盐水(辰欣药业股份有式:***一日有效量/***体重(按70kg计算)×
限公司);阿司匹林肠溶片(Bayer,国药准字(折算系数)=X(大鼠一日有效量)×大鼠体重[9]。
、
)。使用Tanon5200化学发光成像仪观察
经15d干预治疗后,次日将实验大鼠断脊处结果。
死,迅速分离心脏组织置于冰袋上,
后,切取一部分心尖组织,4%的多聚甲醛固定1d,,计量资
转至−80℃超低温冰箱冻存备用。料数据用(xˉ±s)表示,当P<
。
、后及干预治疗后分2结果
别描记心电图。10%水合***醛麻醉大鼠,
部向上的姿态固定于操作台,按人体标准导联(Ⅱ)组内比较:与造模前比较,对照组造模后心电
的连接方式,将正极接在左下肢,负极接在右上肢,图T波电压无明显改变(P>),其余4组造模后
借助生物机能实验系统描记心电图,观察大鼠T波心电图T波电压均显著降低(P<);与造模后
电压变化。比较,对照组、模型组、针刺组治疗后T波电压无明
²的显改变(P>),西药组、针药结合组T波电压均
大鼠心尖组织,4%的多聚甲醛进行固定,共1d,石显著升高(P<)。
蜡包埋,二甲苯脱蜡,用于HE染色。准备70%、组间比较:造模前,各组大鼠心电图T波电压
80%、90%、95%、100%各级乙醇,分步进行梯度脱无明显改变(P>);造模后,与对照组比较,模型
水后甩干,二甲苯透明,镜下观察。组、西药组、针刺组、针药结合组T波电压均显著降
,装入低(P<);与模型组比较,西药组、针刺组、针药
玻璃匀浆容器内,加入10%裂解液,充分裂解后,置结合组均无明显改变(P>)。治疗后,与对照组
于冷冻离心机(4℃,12000r/min)离心,共10min,比较,模型组、西药组、针刺组差异均有统计学意义
取上清液,严格遵循BCA蛋白试剂盒测定浓度,配(P<),针药结合组T波电压无明显改变(P>
置凝胶进行电泳。湿法转入膜上,封闭1h。);与模型组比较,西药组、针刺组、针药结合组
抗,将目标蛋白一起放入杂交袋中,37℃的水浴进行T波电压均显著升高(P<);与西药组比较,针
震荡1h之后,4℃孵育过夜,用TBST洗膜3次(5刺组、针药结合组组T波电压无明显改变(P>
min/次),同样方法配置二抗,用TBST洗膜4次()。见表1。
表1各组大鼠T波电压变化(mV,n=8,xˉ±s)
Tab1Twavevoltagechangesofratsineachgroup(mV,n=8,xˉ±s)
组别造模前造模后治疗后FP
±±±
±±△▲±△▲
±±△▲±△□▲■
±±△▲±▲■
±±△▲±△□■
注:与造模前比较,△P<;与造模后比较,□P<。与对照组比较,▲P<;与模型组比较,■P<;与西药组比较,●P<。
,心肌细胞排列方式较为整齐,心
如图1所示,通过显微镜观察HE染色的心肌肌间隙可见少量炎症反应细胞浸润。西药组轻度
细胞。通过将针刺组、西药组、针药结合组的细胞异常,视野上心肌细胞为横切,部分区域间隙较大,
与空白对照组、模型组的细胞进行比较,发现空白可能为制样所致,可见少量结缔组织。心肌组织中
组心肌组织结构正常,排列整齐紧密有序,组织内含有平行的胶原纤维束及炎性因子。而针药结合
无明显变性和炎症细胞浸润。但模型组大鼠心肌组大鼠与其他组大鼠相比,大鼠的心肌组织结构基
组织结构异常,大量心肌细胞排列不整齐、不有序,本正常,排列层次较分明,无明显的炎性细胞浸润
部分心肌细胞较空白组明显萎缩,少量炎症细胞浸组织。
润于心肌间隙,部分心肌细胞肥大。针刺组心肌组
图1各组大鼠心肌组织HE染色后的形态学变化(×200)
Fig1MorphologicalchangesofmyocardialtissueofratsineachgroupafterHEstaining(×200)
、表);与模型组比较,针刺组、西药组、针药结合组
、(P<);与西药
经Westernblot检测结果表明,与对照组比较,组比较,针刺组蛋白表达量变化不显著(P>),
模型组、西药组、针刺组、针药结合组大鼠ATP通道针药结合组显著下降(P<)。见图、表。
、(P<
、(n=3讨论
ˉ
8,x±s)随着人们物质生活水平的不断提高,人们对高
脂肪食物摄入量的增加,导致心血管疾病发病率极
myocardialtissueofratsineachgroup(n=8,xˉ±s)
高,已成为世界三大致死疾病之一,因此寻找有效
改善AMI的治疗方法具有重要的临床意义[10]。
±±
ATP作为K通道最有效的一种内源性阻滞剂[11],
±**±**ATP
在大多数情况下,细胞内有足够的ATP含量,可以
±**∧∧±**∧∧
与K通道上相应的位点结合,达到饱和,从而关
±**∧∧±**∧∧ATP
闭K通道[12]。在心肌缺血状态下,ATP含量较生
±**∧∧##&&±**∧∧##&&ATP
理状态有所下降,ATP/ADP比率下降,K通道上
的ATP结合不足,K通道活化开放,K+外流增
多,心肌细胞复极化或超极化,动作电位时间减少。
注:与对照组比较,**P<;与模型组比较,∧∧P<;与西药
同时Na+Ca2+通道受到抑制,细胞Ca2+浓度下降,
组比较,##P<;与针刺组比较,&&P<。-
导致收缩力下降,耗氧量减少,对心肌产生保护[13]。
、
本实验结果表明,AMI模型中,、,影响ATP敏感性钾离子通道的功能来实现的,
白表达量均有明显变化,、,说明对心脏功能可
钾离子通道的开放有关。能有着某些影响,但目前对其研究仍较少,其具体
AMI的中医病名为“真心痛”[14],证属痰瘀互机制还有待进一步研究。
结,因脾失健运,胃失和降而痰浊内生,从而导致经
络淤滞,出现心胸憋闷疼痛等症状,其治疗原则为作者贡献度说明:
祛瘀化痰,疏通胸中闭塞之气。本实验选取双侧内荐坤:论文主要攥写人;李兰石:论文主要修改者;王颖:
关穴、足三里穴、心俞穴作为三个刺激点,与王颖教论文审稿人及课题项目主要负责人,蹊径通脉汤创作者。
授自拟的蹊径通脉汤结合,针药并用。蹊径通脉汤
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