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202112December2021
第卷第期
4112Basic&
文章编号:()研究论文
1001-6325202112-1767-07
石蒜碱抑制胃癌细胞系增殖迁移和侵袭
MGC-803、
鲍美美1,徐雯2,王超2,王佳2,苗小芬2∗
苏州大学物理科学与技术学院江苏苏州南京中医药大学附属苏州市中医医院病理科
(1.,215006;2.,
江苏苏州
215009)
摘要:目的探究石蒜碱对人胃癌细胞系细胞增殖迁移侵袭的影响及其可能的作用机制方法
(LH)MGC-803、、。
法和集落形成实验检测细胞增殖能力流式细胞测量术检测细胞周期分布划痕实验检测细胞迁移能力
MTT;;;Tran-
小室法检测细胞侵袭能力检测迁移及侵袭相关基因表达结果对细胞活性的抑制
swell;RT-qPCR。LHMGC-803
呈浓度和时间双重依赖PP的值为能显著抑制细胞的集落形
(<,<),;LHMGC-803
成在浓度达到时集落形成受到完全抑制P作用后将细胞周期阻滞在期P随
,20μmol/L(<);LH,S(<);
着浓度的增加细胞迁移和侵袭受到明显的抑制P作用后细胞内基因表达水平上调而
LH,(<);LHmiR-203,
表达水平下调并呈浓度依赖性PP结论明显抑制细胞的增殖
Slug、MMP2、MMP9,(<,<)。LHMGC-803,
诱导细胞周期阻滞于期抑制细胞的迁移和侵袭上调细胞内基因表达水平
S,,miR-203。
关键词:石蒜碱胃癌迁移
;;;miR-203;Slug
中图分类号:;;文献标志码:
Lycorinehydrochlorideinhibitstheproliferation,
migrationandinvasionofgastriccancercelllineMGC-803
12222∗
BAOMei-mei,XUWen,WANGChao,WANGJia,MIAOXiao-fen
(,SoochowUniversity,Suzhou215006;,
SuzhouTraditionalChineseMedicineHospitalAffiliatedtoNanjingUniversityofChineseMedicine,Suzhou215009,China)
AbstractObjective
:Toinvestigatetheeffectoflycorinehydrochloride(LH)ontheproliferation,migrationand
Methods
invasionofhumangastriccancercelllineMGC-
.
-qPCRwasusedtodetecttheeffectsofLHongeneexpressionofcellmigrationandinvasion.
ResultsPP
TheinhibitoryrateofLHonMGC-803cellswasconcentrationandtimedependent(<,<),
-803cellswassignificantlyinhibitedby
P
LH,andthecolonyformationwascompletelyinhibitedwhentheconcentrationreached20μmol/L(<).
P
CellcyclewasarrestedinSphaseafterLHtreatment(<).WiththeincreaseofLHconcentration,cellmi-
P
grationandinvasionweresignificantlyinhibited(<),theexpressionlevelofmiR-203genewasup-regulated,
收稿日期:修回日期:
2021-04-302021-09-28
基金项目:苏州市中医医院院级课题
(2020010)
∗通信作者(correspondingauthor):
******@
基础医学与临床
1768Basic&(12)
whiletheexpressionlevelsofSlug,MMP2andMMP9weredown-regulatedinaconcentration-dependentmanner
PPConclusions
(<,<).LHsignificantlyinhibitedtheproliferationofMGC-803cells,inducedcellcy-
clearrestingintheSphase,-203genewas
up-regulated.
Keywords
:lycorinehydrochloride;gastriccancer;migration;miR-203;Slug
胃癌是全世界第五大恶性肿主要试剂盐酸石蒜碱成都曼思特生物科
(gastriccancer):(
瘤起源于胃黏膜上皮全世界每年约有万人技有限公司培养基公司胎牛
,,100);DMEM(HyClone);
死于该病这导致了巨大的生态和公共健康负血清公司瑞氏姬姆萨染液南京建成科
,(CLARK);-(
担[1]近年来随着新的诊断和治疗策略的发展技有限公司染液上海碧云天生物技
。,,);MTT、Trizol(
胃癌的发病率和病死率正稳步下降然而由于术有限公司酶染液公
。,);RNA、PI(SigmaAldrich
肿瘤的转移和复发胃癌患者的总体年生存率司试剂公司
,5);RT-qPCR(Vazyme)。
仍然低于[2]
29%。
盐酸石蒜碱是石蒜细胞的培养用含有青
(lycorinehydrochloride,LH):10%FBS、100U/mL
科植物中广泛存在的一种具有药理活性的生物碱霉素和链霉素的完全培养液在
。100U/mLDMEM,
越来越多的证据表明植物来源的具有多种药理条件下培养细胞每
LH37℃、5%CO2MGC-803,2~3d
作用如抗病毒抗菌抗寄生虫抗感染和抗肿瘤作按的比例传代次
,、、、1∶31。
用[3]多种功能的分子机制包括诱导细胞凋法检测细胞活性取对数增殖期的人
。:
亡抑制细胞周期进展和自噬等[4]目前已有证据胃癌细胞以每孔3个细胞接种于
,。MGC-803,3×1096
表明对正常细胞的毒性很低并且对肿瘤细胞孔板中培养后加入含不同浓度的培养基
LH,,24hLH,
的治疗作用强于正常细胞[5]然而关于在胃癌对照组含细胞和培养基空白组含培养基每组设置
,LH,,
中的应用鲜有报道个复孔放入培养箱继续培养分
。6,37℃、5%CO2。
是一类内源性单链小的别于及后每孔加入溶液继续
microRNA(miRNA)、、2448h,20μLMTT,
非编码长度约为个核苷酸在进化中高度培养每孔加入溶液于摇床避光
RNA,22,4h,150μLDMSO
保守能够在端非翻译区与靶信使低速振荡待结晶全部溶解后在酶标仪上测
,3′RNA(mRNA)10min,
结合调节目的基因的表达[6]是一种皮定处的吸光度实验独立重复次细胞增
,。miR-203490nm,3。
肤特异性除参与表皮构成外亦可作为肿殖抑制率AAA
miRNA,,/%=[1-(给药组-空白组)/(对照组-
瘤抑制因子或致癌基因参与多种肿瘤的增殖和转A
空白组)]×100%
移[7]研究显示在结直肠癌中低表达并且集落形成实验检测细胞的增殖能力将不同
。miR-:
抑制胃癌细胞的增殖[8]可通浓度的作用胃癌细胞消化后以
SGC-7901。miR-203LHMGC-80348h,
过靶向毛细血管扩张突变激酶抑制胃癌细胞3个孔接种于孔板内十字法使其均匀分
ATM1×10/6,
的侵袭和转移[9]大量证据表明通过靶布待细胞贴壁后换成新鲜的培养基继
。,miR-203,3dDMEM
向调节癌的起始和发展续培养每天更换次培养基当培养基中出
Slug。7d,31。
本研究探讨对人胃癌细胞细胞增现肉眼可见克隆且显微镜下单个集落细胞计数大于
LHMGC-803
殖迁移和侵袭的影响并分析其作用机制为其作时终止培养弃去培养液清洗次多
、,,50,,,PBS3,4%
为抗癌药物的开发奠定基础聚甲醛固定细胞用瑞氏姬姆萨染液进行染
。10min,-
色去离子水洗净风干后倒置显微镜拍照观察计数
1材料与方法,,
实验独立重复次
3。
:
细胞系人胃癌细胞系为本实验处理胃癌细胞后收集细胞
:MGC-803LHMGC-80348h,,PBS
室保存洗涤次再用冰乙醇于进行固定过夜
。2,70%4℃。
鲍美美石蒜碱抑制胃癌细胞系增殖迁移和侵袭
MGC-803、1769
离心洗涤后用预冷的进行重悬加入用-ΔΔCt法分析表达引物序列见表
,PBS,5μL2mRNA。1。
10mg/mLRNaseA,37℃30min,
的于避光处理最后利用流使用软件进行数据统计分
50μg/mLPI4℃30min,SPSSStatistics20
式细胞仪检测细胞周期分布实验独立重复次析进行单因素方差分析及法进行统计学处
,3。,LSD
划痕实验检测细胞迁移取对数增殖期的胃理实验数据以均数标准差xs表示统计学方
:,±(±),
癌细胞接种于孔板中待细胞汇合达到法采用独立样本t检验进行分析
MGC-8036,。
左右时用黄色枪尖在每个孔内竖直划痕
80%,,PBS2结果
清洗遍后加入含不同浓度的低血清培
3LHDMEM
-803胃癌细胞活性的影响
,0、2448h-
染液进行染色拍照记录各组细胞划痕宽度实验独与对照组相比对细胞增殖的抑
,,,LHMGC-803
立重复次制率随着浓度增加呈递增趋势P或P
3。(<<
小室法检测细胞侵袭将无血清另外随着作用时间的延长抑制作用也显著
:),,
培养基和基质胶以比例稀释增强图
DMEMMatrigel1∶7(1)。
-803胃癌细胞集落形成能力的
,25μLTranswell
平培养箱静置待其凝固使用前先用影响
,37℃30min,
无血清培养基浸润上室膜将作用后的胃与对照组相比作用后细胞形成的集落数
。LH48h,LH
癌细胞消化离心用无血清培养基重悬并量明显减少体积也随之减小P且呈浓度
MGC-803,,(<),
计数在上室中分别加入5个细胞下室加入依赖性当浓度达到时几乎没有单
,1×10,,LH20μmol/L
完全培养基孵育后用棉签擦去膜上克隆形成表
DMEM。24h,(2)。
-803细胞周期的影响
,PBS3,-
姆萨染液染色风干后用中性树脂封片显微镜拍照随着浓度的增加期细胞所占百分
,,LH,G0/G1
实验独立重复次率逐渐降低期细胞所占百分率逐渐升高而
3。,S,G2
检测相关基因的表达收集作期分布比例变化不大图表
-qPCR:LH(2,3)。
-803细胞的迁移
48hMGC-803,Trizol
解利用***仿提取并溶解在水划痕后对照组已有部分细胞向划痕处迁
10min,RNADEPC24h
中使用反转录试剂盒对样品进行反转录测移迁移比例为后细胞在划
。RNA,(±)%,48h
定以合成用实时试剂盒进行痕处的迁移面积逐渐增大迁移比例为
cDNA。SYBRPCR,%±
实验所有引物均获自公司使划痕伤口宽带缩小相比之下
RT-qPCR。Genewiz,%,;
表1PCR引物序列
Fig1PCRprimersequence
geneforwardprimer(5′-3′)reverseprimer(5′-3′)
Slug
GTGTTTGCAAGATCTGCGGCGAGCCCTCAGATTTGACCTGT
Zeb1
TTCAAACCCATAGTGGTTGCTTGGGAGCACCAAACCAACTG
N-cadherin
TGGGAATCCGACGAATGGTGCAGATCGGACCGGATACT
Vimentin
TGAGTACCGGAGACAGGTGCAGTAGCAGCTTCAACGGCAAAGTTC
Snai1
CGAAAGGCCTTCAACTGCAAATACTGGTACTTCTTGACATCTG
MMP2
CCCACTGCGGTTTTCTCGAATCAAAGGGGTATCCATCGCCAT
MMP9
GGGACGCAGACATCGTCATCTCGTCATCGTCGAAATGGGC
miR-203
GTCGTATCCAGTGCAGGGGGGCGGTGAAATGTTTAGG
Actin
CACAGAGCCTCGCCTTTGCCCATGCCGGAGCCGTTGTCG
基础医学与临床
1770Basic&(12)
表2各组MGC-803细胞克隆形成数目的比较
Table2Comparisonofthenumberofcolonyformation
ofMGC-803cellsineachgroup(x±s,n=3)
groupnumberofcolonyformation
control163±
∗
LH5μmol/L71±
∗
LH10μmol/L55±
∗
LH20μmol/L0±0
∗P
<.
∗P∗∗P
<,<
图1MTT法检测MGC--803细胞的侵袭
Fig1MTTassayforthechangesofMGC-803与对照组相比给药组穿膜细胞数明显减少当
,,
cellactivity的浓度为时细胞侵袭率为而
%,
的浓度为时细胞侵袭率仅为
%
组及组细胞的迁移面积明显小于对照P图
(<)(4)。
-803细胞内miR-203、
,%±%、
迁移受到抑制且的抑制作Slug、MMP2和MMP9基因表达的影响
%±%,,48h
用更为明显迁移比例分别为随着浓度的升高细胞内
,%±%、LH,MGC-803N-cad-
P图和的表达水平没有明显
%±%(<)(3)。herin、vimentin、Zeb1Snail
图2流式细胞测量术检测各组MGC-803细胞周期分布情况
Fig2FlowcytometryassayforcellcycledistributionofMGC-803cells
鲍美美石蒜碱抑制胃癌细胞系增殖迁移和侵袭
MGC-803、1771
表3各组细胞周期分布的比较
Table3Comparisonofcellcycledistributionineachgroup(x±s,n=3)
groupG0/G1SG2/%
±±±
∗∗
±±±
∗∗
±±±
∗∗
LH5μmol/±±±
∗P
<.
图3划痕实验检测各组MGC-803细胞迁移情况
Fig3WoundhealingassayformigrationofMGC-803cells
图4Transwell实验检测各组MGC-803细胞侵袭情况
Fig4TranswellassayforinvasionofMGC-803cells
基础医学与临床
1772Basic&(12)
变化和的表达水平显著降低
。Slug、MMP2MMP9,
而的表达水平显著升高其中组
miR-203,5μmol/L3讨论
的表达水平显著高于对照组
miR-203、
和组而和表达水作为重要的转录后调控因子已被广
,Slug、MMP2MMP9miRNAs,
平显著低于对照组和组泛报道参与多种生理和病理过程[10]已有的研究
、/L。
P表证据表明多种在胃癌进展过程中异常表
(<)(4~6)。,miRNAs
达并介导多种靶基因调控细胞增殖侵袭转移
,、、
表4各组MGC-803细胞内N-cadherin、vimentin、等利用检测了多例胃癌样本及配对的
。RT-qPCR
Zeb1基因表达水平的比较非癌样本中的表达情况结果显示胃癌
miR-203,
Table4ComparisonofN-cadherin,vimentin,Zeb1gene样本中的表达显著低于非癌样本且与
expressionlevelsineachgroupofMGC-803miR-203,
胃癌晚期及淋巴结转移密切相关提示的
cells(x±s,n=3),miR-203
下调可能在胃癌的发展过程中起关键作用[11]过
。
groupN-cadherinvimentinZeb1表达显著抑制胃癌细胞集落形成细胞迁
miR-203、
±±±
。LHMGC-803
±±±
miR-203,、
±±±
。
LH5μmol/±±±
。
细胞间充质转化
表5各组MGC-803细胞内Snai1、MMP2、MMP9(epithelialmesenchymaltransition,
是与转移进程有关的复杂生理过程可使细
基因表达水平的比较EMT),
胞间黏附丧失细胞角蛋白结构发生改变提高癌细
Table5ComparisonofSnai1,MMP2,MMP9gene,,
胞的迁移和侵袭能力[12]多种研究表明
expressionlevelsineachgroupofMGC-803。miRNAs
参与该过程[13]本研究将作用于胃癌细胞后
cells(x±s,n=3)。LH,
的表达显著上升而的表达显著降低
miR-203,Slug,
groupSnai1MMP2MMP9提示可能与协同作用抑制胃癌细胞
miR-203Slug
±±±
∗,LH。
±±±
∗∗∗∗
±±±
环境促进肿瘤转移的重要因子被认为是过
∗∗∗∗
LH5μmol/±±±,EMT
程中的诱导剂在大部分肿瘤类型中的表
∗P∗∗P。,MMPs
<,<
,MMP2MMP9
的蛋白水解酶通过破坏基底膜促进肿瘤细胞局
表6各组MGC-803细胞内Slug、miR-203基因,,
部和远处的浸润诱发肿瘤细胞的侵袭转移有
表达水平的比较,。
Table6ComparisonofSlug,miR-203geneexpression研究表明和的血清学水平与胃癌组
MMP2MMP9
levelsineachgroupofMGC-803cells织的侵袭深度癌细胞的转移呈正相关[14]本研
、。
(x±s,n=3)究显示作用后细胞内和
LHMGC-803MMP2
的表达水平下降可能是由于抑制了细胞迁
groupSlugmiR-203MMP9,
移和侵袭能力
±±。
综上所述抑制细胞增殖迁移和
±±,LHMGC-803、
∗∗侵袭可能与上调的表达下调
±±,miR-203,Slug、
∗∗及的表达相关该研究表明低毒高效
LH5μmol/±±。
∗P的对转移性胃瘤的治疗具有潜在的应用前景
<。
鲍美美石蒜碱抑制胃癌细胞系增殖迁移和侵袭
MGC-803、1773
参考文献:
etaletal
[1]BrayF,FerlayJ,SoerjomataramI,.Globalcancer[8]ChiangY,SongY,WangZ,.Aberrantexpressionof
statistics2018:GLOBOCANestimatesofincidenceandmiR-203anditsclinicalsignificanceingastricandcolor-
mortalityworldwidefor36cancersin185countries[J].ectalcancers[J].JGastrointestSurg,2011,15:63-70.
etal
CACancerJClin,2018,68:394-424.[9]ZhouP,JiangN,ZhangGX,.miR-203inhibits
[2]VermaR,-basedtumorinvasionandmetastasisingastriccancerbyATM
emergingtrendsinmolecularbiologyofgastriccancer[J].[J].ActaBiochimBiophysSin,2016,48:696-703.
杨屹立何学元潘新民等抑制体外胃
AmJCancerRes,2018,8:207-225.[10],,,.miR-205-5p
癌细胞系增殖迁移和侵袭基础医学与临床
[3]NairJJ,,[J].,
withinthelycorineseriesofamaryllidaceaealkaloids[J].2020,8:1068-1075.
etal
NatProdCommun,2012,7:959-962.[11]ZhengYS,LiuW,GuoLC,.Theexpressionlevelof
etal
[4]ZhangWN,YangJQ,ChenY,.Lycorinehydrochlo-miR-203inpatientswithgastriccanceranditsclinical
ridesuppressesstress-inducedprematurecellularsenes-significance[J].PatholResPract,2017,213:
cencebystabilizingthegenomeofhumancells[J].Aging1515-1518.
etal
Cell,2021,20:1-13.[12]YangF,LiuX,LiuY,.miR-181d/MALT1regula-
etal
[5]CaoZF,YuD,FuSL,.Lycorinehydrochloridese-toryaxisattenuatesmesenchymalphenotypethroughNF-
lectivelyinhibitshumanovariancancercellproliferationκBpathwaysinglioblastoma[J].CancerLett,2017,
andtumorneovascularizationwithverylowtoxicity[J].396:1-9.
etal
ToxicolLett,2013,218:174-185.[13]LiuW,LiM,ChenX,.microRNA-373promotes
etal
[6]LiJY,ZhangB,CuiJZ,.miR-203inhibitsthein-migrationandinvasioninhumanesophagealsquamouscell
vasionandEMTofgastriccancercellsbydirectlycarcinomabyinhibitingTIMP3expression[J].AmJ
targetingannexinA4[J].OncolRes,2019,27:789-,2015,6:1-14.
etal胡灿金建伟陆仲夏等血根碱抑制人胃癌
[7]ZhangBH,PanXP,CobbGP,.microRNAsason-[14],,,.SGC-
细胞增殖迁移和细胞周期的研究中国药理
cogenesandtumorsuppressors[J].DevBiol,2007,302:7901、[J].
学通报
1-12.,2019,35:844-849.