文档介绍：中国协和医科大学
博士学位论文
大鼠脑缺血性预适应保护机制及保护药物的筛选研究
姓名:张海霞
申请学位级别:博士
专业:药理学
指导教师:张均田;杜冠华

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大鼠脑缺血性预适应保护机制及保护药物的筛选研究毖Tな视Χ韵吡L骞δ艿谋;摘要缺血预适应是指对脑预先进行程度较轻的缺血处理,可以降低随后的致死性缺血的损伤作用,发挥脑保护作用。由于缺血预适应在临床应用受到限制。因此药理性预适应的概念应运而生。药理性预适应是指应用某些活性物质的直接/间接药理作用来发挥类似预适应的保护作用。这一概念的提出不仅有助于了解机体内的抗损伤机制,还有助于寻找脑保护的新途径,为创新药物发现提供了新思路。通过对大鼠脑缺血保护机制的研究,对相应的靶点建立药物筛选模型。结合本室的相关研究将入围药物应用于动物脑缺血模型,观察其对脑缺血的保护作用,并对其作用机制进行初步研究。第一部分脑缺血预适应的保护机制毖Tな视Χ源笫竽匀毖5谋;ぷ饔在本研究中,我们采用接扎大鼠双侧颈总动脉方式观察缺血预适应对大鼠大脑中动脉梗塞的保护作用。与单纯组比较,预适应可以显著降低大鼠梗塞面积.,提示预适应处理可以降低脑损伤程度:在倾斜板实验中,预适应梗塞组在倾斜板上停留时间明显短于单纯组.。。、,平衡能力增强:改善能量供应,清除氧自由基。提取缺血大鼠皮层线粒体,观察缺血预适应对大鼠脑线粒体功能的影响。在线粒体复合酶系统活性测定实验中,单纯接扎大鼠双侧颈总动脉,可以导致线粒体复合酶、活性的增强:而在预适应处理螅庑┟傅幕钚远蓟指粗琳常水平。预适应后梗塞组中线粒体膜肿胀低于组.,.——!
一理组比较无显著性差异。结果表明表明预适应可以保护脑缺血区线粒体的膜整合性。,但可见下降趋势。上述结果提示缺血预处理可能导致过氧化物生成增加启动了预适应保护。第二部分脑缺血保护药物的筛选魄饨换惶逡种萍恋母咄可秆∧P墓燃せ睿梢砸鹱橹鹕恕D魄饨换惶逡种萍镣ü种芅/交换所引发的一系列病理生理过程,而起到细胞保护的作用。选用星形胶质细胞作为钠氢交换体的供体建立钠氢交换体抑制剂的高通量筛选模型。疉.·8涸保ü飧涸乇冉贤耆ā1敬问笛楣采选样品个样品,复筛得到活性样品个。并筛选了中药复方鲅贰个样品对星形胶质细胞囊种谱饔贸氏治=咏植肌8瓷傅玫交钚匝个,其均低于·ǎ渲蠩的小续命汤醇溶部分对星形胶质细胞囊种谱饔贸氏制植迹サ样品对囊种谱饔酶哂ァ4既懿糠盅稾...对星形胶质细胞种谱饔媒锨俊L崾拘⌒来既懿糠趾幸种菩切谓褐氏胞幕钚猿煞帧窬赴诟评胱硬舛ㄉ秆∧P细胞的功能有赖于细胞内、外钙离子浓度维持在一个适当比例。实验证明钙离子的异常跨膜内流和细胞内钙离子在时间分布和时间转运的异常最终导致细胞死亡。我们使用荧光指示剂.⑹屎细咄可秆〉南赴诟评胱硬舛P汀在细胞外为·.·āT谙赴釩.·情况下,高钾去极化引起的负载细胞荧光强度发生改变。梢允瓜赴诟粕甿·5腉、使细胞内钙升高.%、.%。使用此模型筛选化合物觯幸┨崛∥个。样品对细胞内钙浓度的影响基本属于正态分布,.%的样品对钙浓度无影响。小续命汤的脂溶成分多数对神经细胞内钙无影响,而醇溶成分中有个组分可以使神经细胞内钙轻微升高,幅度在%一%之间。数据表明:通过中药各组分之间的相互作用、调节、制约呈现出脑保护的作用。刑烨喾ḿ觳馍窬赴钚氧化还原指示剂刃天青梢员换乖⒉ü庥糜诩觳狻N颐墙.%。ā·
鱼垒坐照塑硭尘吐瓺纳秆〗峁立了觳馍窬低诚赴拘苑椒ǎ⒍許窬赶赴觥窬胶质瘤、星形胶质细胞损伤后使用ê蚆方法进行检测,并比较结果。·皉在孵育后诓挠ü獬闪己玫南咝怨叵怠T谙赴个数在个/孑段冢ü馇慷扔胂赴鍪氏至己玫南咝怨叵怠A检测培养液上清的荧光强度变化,未发现升高趋势。表明荧光物质的生成与细胞有实验结果提示:在神经母细胞瘤、神经胶质瘤、星形胶质细胞经,⒐劝彼崴鹕撕螅瑀检测方法较椒舾校梢越显绲姆现损伤。由于细胞死亡时经过不同的通路