g-氨基丁酸和谷氨酸含量.doc

文档介绍：g-氨基丁酸和谷氨酸含量
ISSN 1009- 14-1260/R 世界华人消化杂志 2004年 5月15日;12(5):1210-1213
高效液相色谱法测定人胃黏膜中γ-氨基丁酸和谷氨酸含量
朱人敏, 秦苏堤, 何小平, 汪芳裕, 李宁, 刘福坤
朱人敏, 秦苏堤, 何小平, 汪芳裕, 南京军区南京总医院消化内科江苏省南京市 210002
李宁, 刘福坤, 南京军区南京总医院普通外科江苏省南京市 210002
项目负责人: 朱人敏, 210002, 江苏省南京市中山东路305号, 南京军区南京总医院消化内科. 电话: [phone]
收稿日期: 2003-11-13 接受日期: 2004-02-01
摘要
目的: 建立一种可同时测定胃黏膜组织微量γ-氨基丁酸(GABA)和谷氨酸(Glu)含量的高效液相色谱法.
方法: 用异硫氰酸苯酯(PITC)作衍生剂,色谱柱为Pico/Tag?氨基酸专用柱,梯度洗脱,紫外检测波长 254 nm..
结果: - nmoL/mL 范围,Glu在 - μmol/mL范围,线性关系良好; -104%,-%; %,%; %%.
结论: 本法稳定、灵敏,可用于胃黏膜组织GABA和Glu含量的检测.
朱人敏, 秦苏堤, 何小平, 汪芳裕, 李宁, 刘福坤. 高效液相色谱法测定人胃黏膜中γ-氨基丁酸和谷氨酸含量. 世界华人消化杂志 2004;12(5):1210-1213
0 引言
加完全,而且简单易行; 易于推广. (2)组织衍生前,采用超滤法去除蛋白,不但去除完全,回收率高,样品也没有被稀释,对于含量极低的氨基酸分析是一个非常有效的手段,但美中不足的是成本较高,需要超速冷冻离心机. (3)组织衍生时,采用PITC作为氨基酸衍生剂,具有稳定,不会产生水解反应,也不会形成多级衍生物的优点[6-11],,还通过调节流动相梯度,使试剂峰与样品峰分离完全.(4)色谱分析时,采用Pico/Tag?氨基酸专用柱,他是Waters 公司的专利产品,可非常好的分离PTC-氨基酸,可同时分析18种常用氨基酸,但有报道柱寿命短,最多能分析150个PITC样品. 在我们实际工作中采用前处理干燥完全,乙腈冲洗再生方法,实际分析样品可达到约500个. (5)实际操作时,± °C柱温,提高柱温能缩短保留时间,降低柱压,但过高的柱温会减少分离度,使γ-氨基丁酸与在其后出现的瓜氨酸以及衍生剂峰重合,± °C为最佳.
生物样品中微量氨基酸的测定在医学领域中占重要地位,经典的氨基酸分离方法是离子交换色谱法,此法需特殊装置,且分析时间较长,而荧光分光光度法和氨基酸自动分析仪检测,灵敏度较低,,多为用邻苯二甲醛在催化剂作用下与氨基酸发生衍生化反应,衍生物经
HPLC分离,电化学检测或荧光检测器检测,并且分析对象为含量较高的脑组织和血清[12-15]. 本文采用P