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遗传性疾病诊断策略
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方法有等位基因特异性寡核苷酸杂交(ASO)、PCR-ELISA、等位基因特异性扩增(ASA)、PCR-RFLP、基因芯片技术进行诊断;
对于一些基因背景未知的点突变,可以采用单链构象多态性(SSCP)、变性梯度凝胶电泳(DEEG)、异源双链分析(HA)、DNA序列测定、蛋白截短测试等方法。
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一、限制性酶切图谱直接分析法
导致某一限制酶识别位点
移位的大片段缺失或插入,
导致某一限制酶识别位点
丧失或获得的点突变,
均可引起相应限制性片段
的长度和数量发生变化。
分析限制性酶切图,即可
诊断出此类突变。
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×
MstⅡ酶切位点(GCTNAGG)
5´
3´
正常基因
5´
3´
突变基因
镰状红细胞贫血患者基因组的限制性酶切分析
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+
﹣
正常人
突变携带着
患者
镰状红细胞贫血患者基因组的限制性酶切分析
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二、ASO探针杂交
受检者基因组DNA或含
突变位点的PCR扩增产物
与标记的ASO探针杂交
主要适用于检测已知点突变
ASO1
ASO2
Normal
Hetero
Homo
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PCR-SSCP
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片段性突变是指DNA分子中较大范围的碱基发生突变,如碱基的缺失、插入、扩增和重组。对于少数核苷酸缺失或插入,可以采用检测点突变的方法,而对于大的片段突变,则使用Southern印迹技术和多重PCR技术。
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