文档介绍：该【使用细菌细胞色素p450制备白皮杉醇的方法和组合物的制作方法 】是由【421989820】上传分享，文档一共【8】页，该文档可以免费在线阅读，需要了解更多关于【使用细菌细胞色素p450制备白皮杉醇的方法和组合物的制作方法 】的内容，可以使用淘豆网的站内搜索功能，选择自己适合的文档，以下文字是截取该文章内的部分文字，如需要获得完整电子版，请下载此文档到您的设备，方便您编辑和打印。使用细菌细胞色素p450制备白皮杉醇的方法和组合物的制作方法
专利名称:使用细菌细胞色素p450制备白皮杉醇的方法和组合物的制作方法
技术领域:
本发明涉及一种使用细菌细胞色素P450BM3(CYP102A1)或其突变体由白藜芦醇(resveratrol)制备昂贵的白皮杉醇(piceatannol)的方法。这项工作部分得到韩国教育科技部21世纪前沿微生物基因组学以及应用中心计划(21CFrontierMicrobialGenomicsandApplicationCenterProgramoftheMinistryofEducation,Science&TechnologyoftheRepublicofKorea)[计划编号MG08-0306-2-0,标题使用微生物细胞色素P450酶基因组学幵发用于精细化学品的人化细菌单力口氧酶(DevelopmentofhumanizedbacterialmonooxygenaseforfinechemicalsusingmicrobialcytochromeP450enzymegenomics)]的支持。
背景技术:
白藜芦醇(3,4',5-三羟基芪)为一种植物抗***,是由植物组织对外部毒性起反应而产生的抗毒物质,并且可见于包含葡萄、李子以及花生在内的多种膳食来源。其展现有益的作用,包括抗氧化作用、消炎作用、心脏保护作用以及抗肿瘤活性作用
(孔(Kimdu)以及苏(Surh),2008;皮罗拉(Pirola)以及弗洛加多(Fr0jd0),2008;安萨哈(Athar)等人,2007)。目前,多项临床前研究结果表明,白藜芦醇是进行癌症预防以及治疗的颇具前景的天然供应(arsenal)。作为一种潜在抗癌剂,经显示白藜芦醇可抑制或延迟培养物中的各种癌细胞以及体内植入的肿瘤的生长。据悉,白藜芦醇的生物活性与其调节各种目标以及信号传导路径的能力有关。白皮杉醇(3,5,3',4'-四羟基芪)是一种在葡萄以及其它植物中发现的多酚。其为所知的对数种细胞系发挥免疫抑制以及抗肿瘤发生活性的蛋白质激酶抑制剂,且经显示,其对免疫细胞以及癌细胞也发挥各种药理学作用(金(Kim)等人,2008b以及其中的参考文献)。在人体中,白皮杉醇是作为白藜芦醇在CYPlBl以及CYP1A2作用下代谢的主要代谢物产生(波特(Potter)等人,2002;匹维(Piver)等人,2004)。此外,重组人CYP1A1、CYP1A2以及CYPlBl催化反式白藜芦醇代谢成两种主要的代谢物白皮杉醇(3,5,3',4'-四羟基芪)以及另一种四羟基芪(匹维(Piver)等人,2004)。
权利要求
,其为由白藜芦醇制备白皮杉醇的反应的催化剂,所述组合物包括至少一选自由野生型CYP102A1以及CYP102A1突变体组成的群组者。
,其特征在于,所述CYP102A1突变体是由选自由以下组成的群组中的至少一个制备用一个选自由丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸以及色氨酸组成的群组的氨基酸取代野生型CYP102A1第47位氨基酸精氨酸(R);用一个选自由苯丙氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、甲硫氨酸、色氨酸组成的群组的氨基酸取代野生型CYP102A1的第51位氨基酸酪氨酸(Y);用一个选自由甘氨酸、丝氨酸、苏氨酸、半胱氨酸、酪氨酸、天冬酰***以及谷氨酰***组成的群组的氨基酸取代野生型CYP102A1的第64位氨基酸谷氨酸(E);用一个选自由甘氨酸、丝氨酸、苏氨酸、半胱氨酸、酪氨酸、天冬酰***以及谷氨酰***组成的群组的氨基酸取代野生型CYP102A1的第74位氨基酸丙氨酸(A);用一个选自由丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、甲硫氨酸以及色氨酸组成的群组的氨基酸取代野生型CYP102A1的第81位氨基酸苯丙氨酸(F);用一个选自由丙氨酸、缬氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸以及色氨酸组成的群组的氨基酸取代野生型CYP102A1的第86位氨基酸亮氨酸(L);用一个选自由丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、甲硫氨酸以及色氨酸组成的群组的氨基酸取代野生型CYP102A1的第87位氨基酸苯丙氨酸(F);用一个选自由甘氨酸、丝氨酸、苏氨酸、半胱氨酸、酪氨酸、天冬酰***以及谷氨酰***组成的群组的氨基酸取代野生型
CYP102A1的第143位氨基酸谷氨酸(E);用一个选自由甘氨酸、丝氨酸、苏氨酸、半胱氨酸、酪氨酸、天冬酰***以及谷氨酰***组成的群组的氨基酸取代野生型CYP102A1的第188位氨基酸亮氨酸(L);以及用一个选自由丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸以及色氨酸组成的群组的氨基酸取代野生型CYP102A1的第267位氨基酸谷氨酸(E)。
,其特征在于,所述CYP102A1突变体是由选自由以下组成的群组中的至少一个制备用亮氨酸(L)取代野生型CYP102A1的第47位氨基酸精氨酸(R);用苯丙氨酸取代野生型CYP102A1的第51位氨基酸酪氨酸(Y);用甘氨酸(G)取代野生型CYP102A1的第64位氨基酸谷氨酸(E);用甘氨酸(G)取代野生型CYP102A1的第74位氨基酸丙氨酸(A);用异亮氨酸(I)取代野生型CYP102A1的第81位氨基酸苯丙氨酸(F);用异亮氨酸(I)取代野生型CYP102A1的第86位氨基酸亮氨酸(L);用缬氨酸(V)取代野生型CYP102A1的第87位氨基酸苯丙氨酸(F);用甘氨酸(G)取代野生型CYP102A1的第143位氨基酸谷氨酸(E);用谷氨酰***(Q)取代野生型CYP102A1的第188位氨基酸亮氨酸(L);以及用缬氨酸(V)取代野生型CYP102A1的第267位氨基酸谷氨酸(E)。
,其特征在于,所述CYP102A1突变体包括选自由以下组成的群组的野生型CYP102A1的氨基酸取代位点F87A、R47L/Y51F、A74G/F87V/L188Q、R47L/L86I/L188Q、R47L/F87V/L188Q、R47L/F87V/L188Q/E267V、R47L/L86I/L188Q/E267V、R47L/L86I/F87V/L188Q,R47L/F87V/E143G/L188Q/E267V,R47L/E64G/F87V/E143G/L188Q/E267V、R47L/F81I/F87V/E143G/L188Q/E267V以及R47L/E64G/F81I/F87V/E143G/L188Q/E267V0
,其特征在于,所述白藜芦醇为反式白藜芦醇。
,所述方法包括使至少一种选自由野生型CYP102A1以及CYP102A1突变体组成的群组的酶与白藜芦醇反应。
,其进一步包括添加产生NADPH的系统。
,其特征在于,所述产生NADPH的系统包括6-磷酸葡萄糖、NADP+以及酵母6-磷酸葡萄糖。
,其特征在于,所述白藜芦醇为反式白藜芦醇。
,其特征在于,所述CYP102A1突变体是由至少一选自由以下组成的群组者制备用一个选自由丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸以及色氨酸组成的群组的氨基酸取代野生型
CYP102A1第47位氨基酸精氨酸(R);用一个选自由苯丙氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、甲硫氨酸、色氨酸组成的群组的氨基酸取代野生型CYP102A1的第51位氨基酸酪氨酸(Y);用一个选自由甘氨酸、丝氨酸、苏氨酸、半胱氨酸、酪氨酸、天冬酰***以及谷氨酰***组成的群组的氨基酸取代野生型CYP102A1的第64位氨基酸谷氨酸(E);用一个选自由甘氨酸、丝氨酸、苏氨酸、半胱氨酸、酪氨酸、天冬酰***以及谷氨酰***组成的群组的氨基酸取代野生型CYP102A1的第74位氨基酸丙氨酸(A);用一个选自由丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、甲硫氨酸以及色氨酸组成的群组的氨基酸取代野生型CYP102A1的第81位氨基酸苯丙氨酸(F);用一个选自由丙氨酸、缬氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸以及色氨酸组成的群组的氨基酸取代野生型CYP102A1的第86位氨基酸亮氨酸(L);用一个选自由丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、甲硫氨酸以及色氨酸组成的群组的氨基酸取代野生型CYP102A1的第87位氨基酸苯丙氨酸(F);用一个选自由甘氨酸、丝氨酸、苏氨酸、半胱氨酸、酪氨酸、天冬酰***以及谷氨酰***组成的群组的氨基酸取代野生型CYP102A1的第143位氨基酸谷氨酸(E);用一个选自由甘氨酸、丝氨酸、苏氨酸、半胱氨酸、酪氨酸、天冬酰***以及谷氨酰***组成的群组的氨基酸取代野生型
CYP102A1的第188位氨基酸亮氨酸(L);以及用一个选自由丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸以及色氨酸组成的群组的氨基酸取代野生型CYP102A1的第267位氨基酸谷氨酸(E)。
,其特征在于,所述CYP102A1突变体是由选自由以下组成的群组中的至少一个制备用亮氨酸(L)取代野生型CYP102A1的第47位氨基酸精氨酸(R);用苯丙氨酸取代野生型CYP102A1的第51位氨基酸酪氨酸(Y);用甘氨酸(G)取代野生型CYP102A1的第64位氨基酸谷氨酸(E);用甘氨酸(G)取代野生型CYP102A1的第74位氨基酸丙氨酸(A);用异亮氨酸(I)取代野生型CYP102A1的第81位氨基酸苯丙氨酸(F);用异亮氨酸(I)取代野生型CYP102A1的第86位氨基酸亮氨酸(L);用缬氨酸(V)取代野生型CYP102A1的第87位氨基酸苯丙氨酸(F);用甘氨酸(G)取代野生型CYP102A1的第143位氨基酸谷氨酸(E);用谷氨酰***(Q)取代野生型CYP102A1的第188位氨基酸亮氨酸(L);以及用缬氨酸(V)取代野生型CYP102A1的第267位氨基酸谷氨酸(E)。
,其特征在于,所述CYP102A1突变体包括选自由以下组成的群组的野生型
CYP102A1的氨基酸取代位点F87A、R47L/Y51F、A74G/F87V/L188Q、R47L/L86I/L188Q、R47L/F87V/L188Q、R47L/F87V/L188Q/E267V,R47L/L86I/L188Q/E267V,R47L/L86I/F87V/L188Q,R47L/F87V/E143G/L188Q/E267V,R47L/E64G/F87V/E143G/L188Q/E267V、R47L/F81I/F87V/E143G/L188Q/E267V以及R47L/E64G/F81I/F87V/E143G/L188Q/E267V0
,所述试剂盒包括至少一种选自由野生型CYP102A1及CYP102A1突变体组成的群组的酶以及产生NADPH的系统。
,其特征在于,所述产生NADPH的系统包括6-磷酸葡萄糖、NADP+以及酵母6-磷酸葡萄糖。
全文摘要
本发明提供一种制备白皮杉醇的方法,且更具体点说,提供一种使用细菌细胞色素P450BM3(CYP102A1)或其突变体由白藜芦醇制备白皮杉醇的方法,以及由白藜芦醇制备白皮杉醇的组合物以及试剂盒。