文档介绍：实验五血液中谷丙转氨酶活力的测定_5
实验五血液中谷丙转氨酶活力的测定
【目的和要求】
了解转氨酶在代谢过程中的重要作用及其在临床诊断中的意义,学****转氨酶活力测定的原理和方法。
【原理】
生物体内广泛存在的氨基移换酶也称转氨酶,能催化α-氨基酸的α-氨基与α-***基酸的α-***基互换,在氨基酸的合成和分解、尿素和嘌呤的合成等中间代谢过程中有重要作用。,它的种类甚多,其中以谷氨酸-草酰乙酸转氨酶(简称谷草转氨酶)和谷氨酸-***酸转氨酶(简称谷丙转氨酶)的活力最强。它们催化的反应如下。
正常人血清中只含有少量转氨酶。当发生肝炎,心肌梗死等病患时,血清中转氨酶活力常显著增加,所以在临床诊断上转氨酶活力的测定有重要意义。
测定转氨酶活力的方法很多,本实验采用分光光度法。谷丙转氨酶作用于丙氨酸α-***戊二酸后,生成的***酸与2,4-二硝基苯肼作用生成***酸2,4-二硝基苯腙。
***酸2,4-二硝基苯腙加碱处理后呈棕色,可用分光光度法测定。从***酸2,4-二硝基苯腙的生成量,可计算酶的活力。
【操作方法】
2,4-硝基苯肼可与有***基的化合物作用形成苯腙。底物中的α-***戊二
酸与2,4-二硝基苯肼反应,生成α-***戊二酸苯腙。因此,在制作标准曲线时,须加入一定量的底物,(内含α-***戊二酸)以抵消由α-***戊二酸产生的消光影响。
先将试管置于37℃恒温水浴中保温10min以平衡内外温度。,4-二硝基苯肼溶液后再保温20min,最后,。在室温下静置30min,以0号管作空白,测定520nm的光吸收值。用***酸的微摩尔数为横坐标,光吸收值为纵坐标,画出标准曲线。
:取2支试管并标号,用第1号试管做为未知管,第2号试管做为空白对照管。,置于37℃水浴内10min,使管内外温度平衡。,继续保温60min。到60min时,向两支试管内各加入2,4-,于37℃保温20min,。在室温下静置30min后,测定未知管的520nm波长光吸收值(显色后30min至2小时内其色度稳定)。在标准曲线上查出***酸的微摩尔数。(用1μmol***)。计算每100ml血清中转氨酶的活力单