文档介绍：对于脂血对生化检测结果的影响大家都略知一二
脂血造成干扰的评估
脂血、溶血和黄疸都会对一些以光学为基础的实验室检验产生干扰,但脂血的干扰与溶血(血红蛋白)和黄疸(胆红素)的干扰在根本上有所不同。脂血中,乳糜微粒和极低密度脂蛋白(VLDL )是悬浮着的颗粒,它们的散射光,产生类似于牛奶中见到的云雾和混浊。此时如采用以光传导作为部分检测方法的检验,脂血就可能会造成干扰。
通过在样本中加入血红蛋白或胆红素,我们可以评价上述经验方法对黄疸和溶血干扰的敏感性,但脂血的评价却要复杂的多,因为我们目前还难以作到:获得相应的脂类标准参考物,通过添加,制备不同程度的脂血样本。 Gkick等报道将一种人工合成的静脉使用乳剂“lntralipib”加入血清中可模似脂血样本,但在本期《临床化学》(Clinical Chem—istr2004;50:2197-2201)中,Bronhorst等指出,添加“ntraLipib”的样本不能真实地模似脂血样本,因为在使用免疫浊度法检测血浆铜蓝蛋白、前清蛋白和铁传递蛋白时,天然的脂血样本会造成检测结果假性偏低,但是加入“lntralipib”的模似脂血样本却不会这样。
怎么会产生这种差异以及如何评判在光学法检验中这种差异存在的可能性?首先,让我们来回顾一下与此类检验相关的有关仪器的光散射特征以及天然脂血样本与添加“lntralipib”的模似脂血样本之间在物理化学性质上的区别。
当电磁辐射以光的形式与某物质(如脂质微粒)相互作用时,粒子会
产生一个偶极矩。偶极矩的大小与电场强度和粒子的极化率成正比。粒子本身不会反射光,光反射的产生是由于溶质(即粒子)和溶剂折射率的不同。极化率与折射率有关,脂质微粒的折射率大多在
。
分光光度法,通过比尔定律A=εbc(ε是摩尔吸光率,b是吸收池的厚度,c是溶液浓度),将吸光度(A)和浓度联系起来;而吸光度又等于透射强负log(l。/l), l。是入射光强度, l是光穿过吸收池后被检测器检测到的光强度。从吸收池中央进行透视,对着光源方向的角度是0度,对着检测器的角度是180度。在分光光度法中,我们假设检测器测得的光强度减弱是由于样本吸收了部分光能的缘故。
光散射存在时,光会向各个方向发散,其散射强度随着角度θ而变化(θ是观测线与X轴之间的夹角),其相对强度可表示为1+cos2(θ).我们可以通过l。/l推算出光透过吸收池后被减少的量,l是散射光强度。通过与吸收光谱的对比,浊度可以被定以为ln( l。/l).只有在光散射强度处在相对较低的状态时,浊度才能与粒子浓度间保持线性关系并通过分光光度检测仪进行分析测定。一旦光散射强度增大就会干扰分光光度法检测。
通过分析摸似的“分析物—溶剂”产品,比如分光光度中胆红素的多重干扰,我们确信光散射干扰光电散射强度和比浊分析。基于日常观察,我们知道影响光散射强度的因素有:悬浮在溶液中的粒子数目、粒子大小、折射率(取决于粒子浓度)以及光波波长。相对而言,波长的影响要小一些。考虑到散射角度以及散射粒子与观测间存在距离,我们瑞利比(
Rayleigh Ratio,Rθ)来代表光散射的相对比例,它与l。/l直接相关。光散射的强度与粒子分子量(M),粒子浓度(c)折射率(n)、折射增量以及波长的负四幂成正比:RθKn2,其中K是常