文档介绍：对羟基苯乙酰***的高效液相色谱分析
实验目的
1. 理解高效液相色谱的优点和应用
2. 了解高效液相色谱仪操作的基本流程
3. 掌握外标法定量方法实验原理
高效液相色谱法是以液体作为流动相,并采用颗粒极细的高效固定相的柱色谱分离技术。高效液相色谱对样品的适用性广,不受分析对象挥发性和热稳定性的限制,因而弥补了气相色谱法的不足。在目前已知的有机化合物中,可用气相色谱分析的约占20%,而80%则需用高效液相色谱来分析。
高效液相色谱和气相色谱在基本理论方面没有显著不同,它们之间的最大差别在于作为流动相的液体与气体之间的性质的差别。高效液相色谱根据固定相性质可分为吸附色谱、键合相色谱、离子交换色谱和大小排阻色谱。在以上四种分离方式中,反相键合相色谱应用最广,因为它采用醇-水或***-水体系为流动相。纯水易得廉价,它的紫外吸收极少。在纯水中添加各种物质可改变流动相选择性。使用最广的反相键合相是十八烷基键合相,又称ODS键合相。
高效液相色谱仪包括以下几部分:流动相、输液系统、进样器、色谱柱、检测器、记录仪。它的基本流程如下:
贮液
器输液泵
梯度装置进样器色谱柱检测器记外标法是以被测化合物的纯品作为标录器准品,取一定量的该标准品(即一定量已知浓度的溶液)注入色谱柱得到其响应值温度控制器收集
器(峰面积或峰高),在一定溶度范围内,进样量与响应值之间有比较好的线性关系,
可用右式表示: A0 = f0 C0 V0
式中 A0 ——峰面积(m2)
C0 ——标样溶液浓度(mol/L)
V0 ——注入的标样溶液体积(mL)
因此由已知的A0、C0、V0值即能求得系数f0值。然后,在完全相同的色谱条件下,注入欲测的某组分(与标样组分相同)体积为V1,得面积A1,根据公式:
A1 = f0 C1V1
由已知A1,V1,及f0值,即能求出C1,即欲测组分的浓度。由于这种方法操作和计算都比较简单,它是一种常用的定量方法。但是该方法要求在分析样品的整个操作过程中,操作条件要稳定。仪器与试剂
1. 仪器 1
WATERS510型高效液相色谱仪;486PR/910型紫外检测器;依利特ODS C-18柱(5um,);惠普公司的HP3395型积分仪;微量进样器;超声仪。
2. 试剂
乙***(色谱级);水为去离子水,然后二次蒸馏;对羟基苯乙酰***标
样,待测样。实验步骤
1. 色谱条件
按操作说明书使色谱仪正常工作,采用等度洗脱方法,流动相为乙***/缓冲溶液(15/85,V/V),用前过滤和脱气,,紫外检测波长225nm,柱温25℃,