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**基因表达系统
1、大肠杆菌表达系统
2、芽孢杆菌表达系统
3、乳酸菌基因表达系统
4、链霉菌基因表达系统
5、酵母菌表达系统
6、丝状真菌表达系统
7、昆虫表达系统
8、哺乳动物细胞表达系统
9、植物生物反应器
1、大肠杆菌表达系统()
1)大肠杆菌表达系统的特点:
(1)遗传背景清楚
(2)目的基因表达水
平高
(3)培养周期短
(4)抗感染能力强
2)大肠杆菌表达系统研究的发展趋势
完善现有的表达系统;
重组蛋白质的正确折叠;
构象形成;
蛋白质的分泌;
菌体表面表达技术及其应用;
重组蛋白质修饰加工。
真核基因在不同表达系统的表达
表达白细胞介素IL-3(成熟蛋白)
大肠杆菌表达系统20-30u
地衣芽孢杆菌表达系统250-300u
酵母菌表达系统20u
哺如动物细胞2u
2、芽胞杆菌表达系统(GeneExpressionsysteminBacillus)
1)特点
枯草芽孢杆菌是非致病的土壤微生物,严格生长在有氧条件下。
枯草芽孢杆菌遗传学相当先进,很多噬菌体和质粒适合用作克隆载体。
芽孢杆菌可大量产生几种商品酶,如-淀粉酶,蛋白酶及苏云金杆菌的杀虫晶体蛋白等,发酵技术发达。
具有单层细胞膜组成较简单的细胞外壳。
易于分离纯化分泌蛋白
2)枯草杆菌宿主菌株
由于大肠杆菌的CaCl2转化法对枯草芽孢杆菌无效
(1)选择可转化的菌株
*168菌株及突变体:
营养要求、芽孢形成和萌发、蛋白酶缺失、重组缺陷、限制/修饰系统缺陷、转座子插入
(2)选择转化的方法
感受态转化:
原生质体转化:
电转化:甘氨酸添加培养感受态
其它方法,如转导、结合转移
3)、可作为宿主的其它菌种:
嗜碱芽孢杆菌Bacillusabcalophilus
蛋白酶
淀粉芽孢杆菌Bacillusamyloliquefacilus
-淀粉酶
短芽孢杆菌Bacillusbrevis
地衣芽孢杆菌Bacilluslicheniformis
淀粉酶,抗真菌肽
巨大芽孢杆菌Bacillusmegaterium
淀粉酶
短小芽孢杆菌Bacilluspumilus
蛋白酶
球形芽孢杆菌Bacillussphaericus
灭蚊***蛋白
嗜热芽孢杆菌Bacillusstearothermophilus
高温-淀粉酶
苏云金芽孢杆菌Bacillusthuringiensis
杀虫晶体蛋白
耐碱的芽孢杆菌Bacillusalcalophilic
碱性蛋白酶
炭疽芽孢杆菌Bacillusanthracis
(2)乳酸菌菌种鉴定
REA(RestrictionEndonucleaseAnalysis)
16SrRNA(PCR)
SDS-PAGE