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专利名称::口服接种的方法和组合物的制作方法
技术领域:
:本发明涉及利用作为疾病防治辅助手段的饮用水或糖浆对健康动物进行口服接种的方法和组合物。
背景技术:
:有多种折磨动物种群的疾病,使得他们衰弱和死亡。以前对这些传染疾病的成功接种是为了改善或消除感染动物体内疾病的症状。口服接种是优选的方法,因为它使注射变的并非必需。在大量的家畜和家畜,如猪、家禽、牛、绵羊、山羊及马中进行注射接种是非常耗时的,并且工作量大。此外,肌肉注射会对肉产生破坏,并给动物造成紧张。在家养宠物,如狗和猫中,通过进行有效的口服疫苗来预防普通的感染就可避免接受肌肉注射而造成的紧张。世界上,猪和家禽养殖场的规模已经有了相当的提高。现在许多养猪场可容纳10,000多头断奶小猪,而现在许多家禽养殖场甚至可容纳更多的家禽。对每头猪或每只家禽进行传统的疫苗接种既耗时又比较困难。在接种过程中,要对每头猪或家禽捕抓、注射至少一次,在许多情况下还需要两次,并要对其进行原因分析。由于存在这些挑战,所以通过饮用水对多组动物给药(群体给药)以有效疫苗来保护猪或家禽免于感染将会为养殖者带来很大的益处,可以节省劳动力成本,并可避免紧张和由针头造成的肉的损害。最后,家养充物,如狗和猫,将从口服疫苗给药受益,可以减轻他们的紧张并避免注射。以前,通过饮用水对大群家禽进行疫苗群体给药的主要缺点是水消耗上的波动引起疫苗剂量不连续
,以及存在许多动物根本就没有给药任何疫苗这种可能。此外,当混合到水中时,疫苗中的细菌或病毒因子的生存能力和稳定性都受到影响。随着时间的推移,这些因子在水中的稳定性会大幅度下降。因此,具有诱惑力的是提供一种用于在有限时间内对动物群体给药的疫苗,这样就可避免免疫原因子的不稳定。提供能够保证整个动物群体持续对含有疫苗的饮用水自主给药的疫苗也是非常有益的。对可预防感染因子引起的疾病的疫苗口服给药的另一主要缺点是这些因子常常具有令人不舒服的气味和滋味。对大群动物进行群体给药的疫苗制剂必须对这些动物具有吸引力,否则,他们就不会对他们进行自主给药,也即他们自主饮用。同样的,对那些栏养动物或单独圈养的动物给药的疫苗制剂味道可口将是有益的,这样他们会对这些制剂进行自主给药。最后,对家养宠物来讲,一般是兽医或动物健康护理工对这些动物通过嘴来给药,但这经常遭到动物的拒绝并将疫苗吐出。因此,提供对动物来说是诱人的、并且能够提高成功给药的可能性和疫苗摄取的口服给药疫苗具有很大的益处。WO98/51279中描述了对含有编码抗原肽段的DNA的口服疫苗进行给药,其中的抗原肽段是结合到聚合物微粒中的。味道增强因子可结合到此聚合物微粒中。然而,
这样的微粒不是水溶性的,不能提供对引起疾病的细菌或病毒的给药。Bell等(AustralianVeterinaryjournal68(3),1991,-89)描述了通过群体给药方式对鸡给药鸡新城疫疾病V4株疫苗。该疫苗是通过以下三种方式给药的1)将其与脱脂奶混合并在饮用水中给药;2)以气雾剂形式给药;3)以粗喷雾剂形式给药。虽然有血清学证据证明产生了抗鸡新城疫病毒的抗体,但是没有对病毒攻击进行研究。因此就不可能确定这些家禽对抗疾病的疫苗的接种程度。更重要的,没有进行努力来使这些疫苗制剂进行改进以使其对这些家禽来讲更可口些。Grieve描述了对鸡进行群体给药的疫苗进行的评估,此疫苗是通过在鸡新城疫疾病疫苗制剂中添加兰色染料并利用饮用水或喷雾方式进行群体给药的。选用染料是为了利用他们在这些家禽舌上的暂时染色来监测疫苗的消耗。这些染料证明,仅仅有约80%的家禽饮用了疫苗。没有进行努力来使疫苗制剂对家禽来讲更可口一些。因此,制备一种有效的、对动物来说可口的、并节省劳动力的口服给药疫苗并对其给药是令人极其向往的。这样的疫苗制剂为兽医、牛奶和肉生产商提供了一种便利的战略工具来提高羊或其他动物的健康,而在兽医行医中,动物不拒绝的、更可口的口服疫苗是更诱人的。发明简述本发明包括为动物提供保护以抵抗疾病的方法,该方法包括
(a)将可口的水溶性食用香料与水溶性载体混合以对口服给药疫苗给药;(b)进一步将步骤(a)中的混合物与选自细菌和病毒的抗原混合,此抗原是用来作为口服给药疫苗中的活性成分的,及(c)对动物给药步骤(b)中的口服给药疫苗,保护其免于遭受与抗原感染相关的疾病。本发明也包括提高动物对口服给药疫苗的摄取的方法,此方法包括(a)将可口的水溶性食用香料与水溶性载体混合以对口服给药疫苗给药;(b)进一步将步骤(a)中的混合物与选自细菌和病毒的抗原混合,此抗原是用来作为口服给药疫苗中的活性成分的,及(c)对动物给药步骤(b)中的疫苗混合物;(d)通过食用香料来诱导提高动物对口服给药疫苗的摄取。本发明进一步包括口服给药动物疫苗制剂,此制剂含有以选自细菌和病毒组成的组且作为活性成分的抗原、可口的水溶性食用香料及水溶性载体以对口服给药动物疫苗进行给药。发明详述所有的专利、专利申请、出版物和此处引用的其他文献在此处全部引用作为参考。在有矛盾的情况下,以本发明中的描述,包括定义为准。此处所用的名词“群体给药”定义为对大型养殖场中聚集在一起的动物群体大规模给药水溶性疫苗。一般来讲,这样的养殖场喂养猪和家禽。此处所用的名词“swine“和“pig”或“pigs”是同义的。此处所用的名词“家禽”定义包括有鸡、火鸡和鸭。此处所用的名词‘可口的食用香料’定义为一种味道增强因子,已经证明,对接受给药动物或动物群体来说是比较理想的。在将本发明中的口服给药疫苗制备成制剂前,需要对添加有可口的食用香料的饮用水或糖浆进行自主给药以观察确定其理想程度。这些食用香料的未限定的实施例包括水果食用香料如草莓、樱桃、葡萄、西瓜、苹果等、鱼食用香料、肉食用香料及动物
或动物群优选的其他食用香料。水果食用香料特别优选的用于对猪、马、绵羊、山羊、猫和狗的给药。肉食用香料特别优选的用于对狗和猫的给药。鱼食用香料特别优选的用于对猫的给药。此处所用的名词“动物处理人”包括农场工人、兽医、动物健康专业人员或其他负责照顾动物并对动物给药药物、疫苗和/或食物的人。本发明包括为动物提供疾病保护和诱导提高动物对口服给药疫苗摄取的方法和组合物。本发明中的方法涉及将细菌或病毒抗原与可口的水溶性食用香料混合,并进一步将抗原和食用香料混合物与水溶性载体混合来对动物口服给药疫苗,这样就为动物提供保护以免于遭受与混合抗原感染有关的疾病,并可通过食用香料诱导提高动物对疫苗的摄取。因此,本发明包含通过作为疾病防治辅助手段的饮用水或糖浆来对健康动物进行口服接种的方法和组合物。可口的食用香料混合物为疫苗制剂提供了可口的味道,这样就可提高动物对疫苗制剂的自主给药,和/或避免当动物处理人对动物进行给药时动物拒绝服用疫苗制剂。制备到本发明中的疫苗中的抗原是细菌和病毒疾病引发因子。尤其优选的是活体细菌和病毒。当对活体细菌或病毒为抗原的疫苗制剂给药时,活体抗原的生存能力是尤其受到关注的。动物或动物组必须在抗原的生存能力严
重消退前吸收此疫苗,这样才能保证最大的抗原性和获得强免疫应答。我们将“无毒性的”或“失活的”细菌或病毒理解为是不能引起动物疾病的,并且本领域中的熟练技术人员认为将这些“无毒性的”或“失活的”细菌或病毒所包括的任何株作为疫苗对动物给药是安全的。例如,可引起包括发烧、严重的鼻排泄物或眼排泄物在内的轻微临床症状的菌株就在本发明的范围之内,因为我们认为这是可以接收的疫苗副作用。一种激活细菌或病毒抗原以使其用于本发明的方法是在抗原基因组中导入基因突变,例如核苷酸替代、插入和/或缺失,这样就能废除抗原的致病能力。重组DNA技术也可用于在细菌或病毒抗原基因组中造成工程缺失、插入和替代以便制备缩短的菌株。这些方法在本领域中是众所周知的,并在如Sambrooketal.,MolecularCloningALaboratoryManual,ColdSpringsLaboratory,ColdSpringsHarbor,NewYork,1989,中有描述。本发明中,其他弱化或失活细菌或病毒抗原的方法对于本领域中的普通熟练技术人员来说都是众所周知的。此处所用的“修饰的活体病毒”或“修饰的活体细菌”是已经进行修饰的病毒或细菌抗原,一般是通过在组织培养细胞中进行传代来弱化其致病能力,但对动物给药时,其保留了保护动物免
于疾病和感染的能力。本发明中的病毒抗原的“感染单位”定义为TCID50,或感染或杀伤50%组织培养细胞所需的病毒量。给定培养物中的细菌抗原的浓度可通过本领域中熟知的标准方法,如显微分析、克隆计数或液体培养物的分光光度计分析。细菌***抗原浓度可通过在适当动物模型如鼠中确定致死浓度(LD)和LD50来得到。利用本领域中的标准方法可从新鲜收获的病毒培养物来制备疫苗。利用标准技术(细胞病效观察、免疫荧光检验法或其他基于抗体之上的检测方法)对病毒的生长进行监测,当病毒浓度足够高时进行收获。在将其包含入本发明中的疫苗之前,进一步对这些病毒原料进行浓缩或利用传统方法进行冷冻干燥。其他方法,如Thomas,etal.,Agri-Practice,,pp26-30中描述的方法都可应用。按照本领域中已知的方法对细菌进行生长培育。用于本发明中的细菌抗原可以液体形式或也可以冷冻干燥形式通过可口的食用香料和水溶性载体进行重建。一般来说,对一个体动物给药的一剂疫苗中待给药的细菌抗原的优选量大约为105-1011菌落形成单位(“CFU“),优选约106-1010CFU,最优选107-109CFU。在另一优选实施方案中,有效剂量为约105-108CFU/剂。一般来说,-,优选104-105TCID50/ml。一般来讲,制备到本发明中的疫苗中的特定细菌或病毒抗原的剂量或有效量依赖于动物或待接种动物的年龄大小、健康状况和免疫状况
(如既往抗原接触、母体抗体),以及所用的特定抗原。本领域中的熟练技术人员可按照常规方法来确定合适的有效剂量,包括待给药的最低抗原水平和水或糖浆剂量计算。正如上文特别提到的,任何感染性的、弱化的或失活的、活的或死的细菌或病毒因子可制备到本发明的疫苗中并按照本发明中的方法给药。尤其优选的抗原的非限制实施例包括那些感染下列动物的抗原猪猪红斑丹毒丝菌、大叶性肺炎放线杆菌、猪肺炎支原体、大肠杆菌K88、K99、F41和987P、产气荚膜梭菌C型、猪霍乱沙门氏菌、多杀巴斯德氏菌、支气管败血性博代菌、布拉迪斯拉发钩端螺旋体、犬钩端螺旋体、感冒伤寒型钩端螺旋体、哈德焦钩端螺旋体、波摩那钩端螺旋体、黄疸钩端螺旋体、猪流感病毒、Circovirus、PRRS病毒、水痘、轮状病毒、猪呼吸道冠状病毒、细小病毒、伪狂犬病、可传递肠胃炎因子。马马链球菌、破伤风梭菌、马流感病毒A1和A2株、马鼻肺炎型1、1b和4、东方马脑脊髓炎病毒、西方马脑脊髓炎病毒、委内瑞拉马脑脊髓炎病毒、马轮状病毒。牛大肠杆菌O157H7、多杀巴斯德氏菌、溶血巴斯德氏菌、犬钩端螺旋体、感冒伤寒型钩端螺旋体、哈德焦钩端螺旋体、波摩那钩端螺旋体、黄疸钩端螺旋体、产气荚膜梭菌C型、产气荚膜梭菌D型、肖氏梭菌、Clostridiumsodellii、都柏林沙门菌和鼠伤寒沙门氏菌、牛轮状病毒、牛冠状病毒、
牛鼻气管炎病毒、牛腹泻病毒、副流感-3病毒、呼吸道合胞体病毒。家禽鼠伤寒沙门氏菌、Sepullinapilosicoli、马雷克病病毒、鸡传染性法氏囊病病毒、传染性支气管炎病毒、新城疫病毒、呼肠孤病毒、土耳其鼻气管炎、Couidiosis。狗犬钩端螺旋体、感冒伤寒型钩端螺旋体、哈德焦钩端螺旋体、波摩那钩端螺旋体、黄疸钩端螺旋体、犬布氏疏螺旋体、犬埃里希体、犬支气管败血性博代菌、犬兰伯贾第虫、犬细小病毒、犬狂犬病毒。猫猫鹦鹉热衣原体、猫免疫缺陷病毒、猫传染性腹膜炎病毒、猫白血病病毒、猫鼻气管炎病毒、猫泛白细胞减少症病毒、猫狂犬病病毒。在许多情况下,制备和生产用于制备到本发明的口服给药疫苗中的细菌和病毒抗原会使得抗原具有对动物来说不可口的味道。因此,当对溶解在饮用水或糖浆中的疫苗口服给药时,这些动物就会因为不舒服的味道而不饮用足够的疫苗制剂或拒绝饮用糖浆并吐出饮用了的糖浆。在本发明中,混合到疫苗制剂中的可口的食用香料促进和提高了动物对口服给药疫苗的摄取。这些可口的食用香料是以由所用食用香料表示的浓度来进行混合的。%-%或更高。液体食用香料可利用滴管或其他方式添加到疫苗制剂中。如果使用前是以粉状形式存在,可对他们进行再水合并混合到疫苗制剂中。当对猪或家禽给药本发明中的口服疫苗时,优选的给药方法是通过群体给药方式对群居在一起的大群动物给药。将疫苗制备到为动物提供连续饲料的饮用水或水滴中,动物就可饮用水并通过饮用包含在水中的疫苗进行自主给药。连续饲料或水滴装置的一个实施例是自动化水均衡装置,称做
DosatronTM(DosatronInternationalInc.,Clearwater,Fla)。在一优选实施方案中,此自动化水均衡装置向一水滴喂食器提供了少量的水溶性疫苗/食用香料连续饲料,随后通过群体给药方式为动物提供水到房屋中的供给设备,例如通过喷嘴以水滴方式给药。当对永久的单独圈养或喂养在厩、栏、圈中的牛、马、绵羊、山羊或其他家禽和家畜给药本发明中的口服疫苗时,优选的给药方法是利用桶或通过引水槽来给药。当对动物或家养宠物如猫或狗给药本发明的口服疫苗时,可以利用溶解在饮用水中,或优选溶解在糖浆中给药。这样的糖浆优选的利用装置如注射器给药入口中。这样的给药方式优选的部位是给药到喉后部。按照本领域中已知的方法可将口服疫苗制备到糖浆中。在下列文献中可发现制备糖浆疫苗的非限制性方法。“Preparationofhighconversionsyrupsbyusingthermostableamylasesfromthermoanaerobes”,Saha,.;Zeikus,.,EnzymeAndMicrobialTechnology,,,-231(1990);“ProblemofTheMass-VolumePreparationofMedicinalAndTableSyrups”,