文档介绍：生物化学与生物物理进展
ProgressinBiochemistryandBiophysics
2010,37(4):433~440

用壳聚糖亲和磁性微球纯化血浆凝血酶的研究
李梅基 1,2) 李昭华 2) 胡建成 1) 董先智 2)*
(1) 兰州大学生命科学学院,兰州 730000;2) 中国科学院生物物理研究所,北京 100101)
摘要通过化学共沉淀法合成纳米粒子 Fe3O4 磁核,以壳聚糖为包裹材料包被自制的磁核,采用乳化交联法制备了具有核-
壳结构的磁性高分子微球- 壳聚糖磁性微球,并偶联肝素配基得到了一种新型亲和磁性微球,应用 SEM、FT-IR、XRD 等对
微球的粒径、形貌、结构和磁响应性进行了表征. 考察了该亲和磁性微球对凝血酶的分离纯化性能,并与传统的 DEAE 离子
交换色谱法进行了比较. 结果表明,所得亲和磁性微球具有较窄的粒径分布、形状规整,粒径在 50nm 左右. 对凝血酶一步
吸附纯化获得了比活为的酶,得率 85%,纯化倍数 ,而传统柱层析法得率为 72%,纯化倍数仅为
. 制备了壳聚糖亲和磁性微球,并将磁分离技术应用于凝血酶的分离纯化,得到了较好的效果,这将对于凝血酶的纯化
及生产具有一定参考价值.
关键词亲和磁性微球,壳聚糖,凝血酶,磁分离,纯化
学科分类号 Q658 DOI: .
凝血酶()是一种专一性很强的丝氨素亲和层析三种方法. 在上述方法中,获得产品纯
酸蛋白水解酶,在调节血小板凝集和血液凝固的止度最好的方法是亲和层析法,在层析柱中使用亲和
血剂中发挥多功能作用[1-2]. 它能水解血纤维蛋白性填料如肝素化的葡聚糖等,利用亲和吸附分离制
原的 4 个 Arg-Gly 肽键,产生不溶性的血纤维蛋备凝血酶. 然而亲和柱层析法的一个局限是对上样
白,使血液变成凝胶而发生凝固. 专一的酶切位点液体的质量要求较高,前期粗分离得到的样品液中
使得凝血酶在基因工程中也得到了广泛应用,将凝常常含有悬浮微粒和各类杂质,如不予以预纯化,
血酶酶切识别序列作为融合蛋白接合位点[3-4]进行会出现淤堵、层析效率低下等问题并影响产品的质
基因工程蛋白质产品后续加工处理. 在临床上,凝量. 此外,采用亲和层析法分离凝血酶比较耗时,
血酶广泛适用于局部止血[5],可用于手术中不易结还会产出大体积的蛋白质稀溶液,对生产制备都有
扎的小血管止血、消化道出血以及外伤出血等. 目较大影响. 目前,国内外还尚未见到运用亲和磁分
前,医用和试剂用凝血酶的生产主要依靠从天然产离技术快速纯化凝血酶的报道.
物如动物血浆中分离纯化. 从血浆中分离纯化凝血磁性高分子微球是将磁性粒子分散、包裹于高
酶主要包括凝血酶原的提取、凝血酶原的激活和凝分子材料中或者包覆在高分子材料表面形成的具有
血酶纯化几个步骤. 国内外凝血酶纯化的方法有很特殊功能团的微球[6],是近些年发展起来的一种新
多种,传统的物理化学方法即丙酮沉淀法和硫酸铵型功能高分子材料. 它除具有高分子微粒的特性,
分级盐析法,这两种方法操作简便、成本低,但得如可通过共聚、