文档介绍：淀粉含量测定方法大致可分为酸水解或酶程序
淀粉测定说明书
其次是淀粉转化为葡萄糖淀粉葡萄糖苷酶和葡萄糖的测量。方法76-11低估了淀粉含量在一定范围内的样品和材料,包括高直链淀粉玉米淀粉和许多谷物加工的产品。当今使用的大多数方法A-淀粉酶结合处理热稳定期间或紧随淀粉糊化工序。难以糊化(如高直链淀粉玉米淀粉)的样品,如氢氧化钠或氘代二甲亚砜(DMSO)溶剂。在一个过程中,以确保完全溶解,淀粉,膳食纤维的测定,Englyst 和Cunmmings的包括处理淀粉脱支酶,支链淀粉酶。
为了满足非常样品的需要,尚未定量和可靠的,程序为总淀粉Megazyme的测量产生,并备有一个总淀粉耐高温A-淀粉酶和淀粉葡萄糖苷酶(麦克利等)的基础上使用的检测试剂盒。该方法已通过AOAC()()。
最近,耐高温α-淀粉酶是积极和稳定在较低的pH值变得可行。因此,我们用酶更新了我们的总淀粉的方法。这种改进的主要优点是让耐高温A-淀粉酶和淀粉葡萄糖苷酶活化在同一PH值(),这反过来,简化了要执行的步骤法和生产的异构麦芽糖(4-A-吡喃葡糖基-D-果糖)的可能性减至最小,这是抗淀粉葡萄糖苷酶和A-淀粉酶水解。
Megazyme总淀粉分析程序可以测量总淀粉广泛的食品,饲料,植物和谷物产品(自然或加工)。大多数样品(如面粉),淀粉完全溶解大约培养样本在100℃并有耐高温A-淀粉酶的存在。样品中含有高含量的抗性淀
粉(例如高直链淀粉玉米淀粉),要求预先溶解在寒冷的2 M KOH或相关DMSO。含有可溶性淀粉或麦芽糖糊精,烹饪用的热稳定的样品A-淀粉酶是不需要的。
原理:
耐高温α-淀粉酶水解淀粉转化为可溶的支链和直链麦芽糊精(1)。
1)淀粉+ H2O 麦芽糊精
在必要的情况下,在样品中的抗性淀粉是预先溶解,由搅拌在约与2MKOH样品的。 4℃进行中和,然后用A-淀粉酶(2)与乙酸钠缓冲液和水解。可替代地,在100℃下溶解在DMSO中是有效的。
(2)抗性淀粉+ H2O 麦芽糊精
定量水解淀粉葡萄糖苷酶(AMG)到(3)D-葡萄糖的麦芽糖糊精。
(3)麦芽糖糊精 D-葡萄糖
D-葡萄糖被氧化成D-葡萄糖酸与1摩尔的过氧化氢(H2O2)的定量测定采用过氧化物酶和一种醌亚***染料生产中的比色反应的释放。
(4)D-葡萄糖+ O 2+ H 2 O 葡萄糖氧化酶 D-葡萄糖酸+过氧化氢
(5)2H2O2+ P - 羟基苯甲酸4 - 氨基安替比林醌亚***染料+4H2O
含有高浓度的D-葡萄糖和麦芽糖糊精的样品在分析前用含水乙醇(80%体积/体积)洗涤。单个样品的分析,可以在70分钟之内进行。 20样品2h内进行分析。
特异性,灵敏度,线性度和精度:
该法是具体的α-葡聚糖(包括淀粉,糖原,植物糖原和非抗性麦芽糊精)。
。-葡萄糖()/ L。-葡萄糖()/升,。
每次测定D-葡萄糖检测线性范围为5-100微克。在使用一个样本的解决方案,。,这对应于D-?/ L的样品溶液。样品制备过程中,如果样品稀释,结果乘以稀释倍数,即为F。如果在样品制备中,将样品称重,例如乘以10g / L,? g/100g可以预期的。
干扰:如果D-葡萄糖的转换已经完成,在测定中(约5分钟)指定的时间内,它可以被普遍认为没有干扰发生。然而,这可以进一步检查,通过加入D-葡萄糖()的比色皿上完成。显著增加的吸光度应得到遵守。被分析样品中的干扰物质,可以识别包括内部标准。量化这一标准将有望恢复。即执行恢复实验的在最初的提取步骤中添加D-葡萄糖的样品,在样品处理和提取的损失确定。
安全性:D-葡萄糖测定中使用的试剂是不是在这个意义上的有害物质规例的有害物质。然而,浓缩缓冲液中含有作为防腐剂的叠氮化钠(%w / v的)。一般安全措施适用于所有的化学物质,应当坚持。
试剂盒:从Megazyme适合执行共100份测定试剂盒。试剂盒包含完整的分析方法:
瓶1:耐高温α-淀粉酶(10mL,3000 U / ml的Ceralpha试剂在pH ℃或1600U/℃)。> 4年,在4℃稳定。
瓶2:淀粉葡萄糖苷酶(10mL,3300U/mL可溶性淀粉(或200 U