文档介绍：该【用于检测jak2基因v617f位点突变的试剂盒的制作方法 】是由【421989820】上传分享，文档一共【4】页，该文档可以免费在线阅读，需要了解更多关于【用于检测jak2基因v617f位点突变的试剂盒的制作方法 】的内容，可以使用淘豆网的站内搜索功能，选择自己适合的文档，以下文字是截取该文章内的部分文字，如需要获得完整电子版，请下载此文档到您的设备，方便您编辑和打印。用于检测jak2基因v617f位点突变的试剂盒的制作方法
用于检测jak2基因v617f位点突变的试剂盒的制作方法
本实用新型公开了一种用于检测JAK2基因V617F位点突变的试剂盒,包括盒体、盒盖和设置在盒体内的衬垫,所述衬垫上设有小孔,装有JAK2-Wild-F引物的试剂管、装有JAK2-Mutation-F引物的试剂管、装有JAK2-R引物的试剂管、装有探针Probe的试剂管、装有PCR?MIX试剂的试剂管被设置在所述小孔内。本实用新型的试剂盒结构简单、设计合理,方便携带、保存,不易受污染,检测灵敏度高,检测步骤简单、快捷。
【专利说明】用于检测JAK2基因V617F位点突变的试剂盒
【技术领域】
[0001]本实用新型属于分子生物学【技术领域】,涉及基因突变检测试剂盒,尤其涉及一种用于检测JAK2基因V617F位点突变的试剂盒。
【背景技术】
[0002]JAK2基因属于JAK基因家族,编码一种JAK酪氨酸蛋白激酶,一部分生长因子和大部分细胞因子能通过JAK激活信号转导因子和转录激活因子(STAT),从而影响基因的转录调节。JAK-STAT信号转导途径参与细胞的增殖、分化、凋亡以及免疫调节等许多重要的生物学过程。JAK2可以介导多种细胞因子和生长因子的信号转导,包括红细胞生成素
(ΕΡ0)、白细胞介素(IL-3)、生长因子(GH)、血小板生成素(ΤΡ0)、粒巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和粒细胞集落刺激因子(G-CSF),从而调节细胞生长、增殖和分化。JAK2基因特定位点的突变将破坏正常LAK2蛋白酪氨酸激酶活性的自我抑制作用,导致造血细胞的异常增生。
[0003]骨髓增殖性肿瘤(MPN)是某一系或多系分化相对成熟的骨髓细胞不断地克隆性增殖所致的一组肿瘤性疾病的统称,该疾病包括真性红细胞增多症(PV)、原发性血小板增多症(ET)、原发性骨髓纤维化(PMF)、慢性骨髓细胞性白血病(CML)。研究表明,骨髓增殖性肿瘤(MPN)常伴有JAK2-V617F突变,该突变是JAK2基因的第1849位突变,导致第617位的缬氨酸(V)变为苯丙氨酸(F),该突变发生在65?97%的真性红细胞增多症(PV)、23?57%的原发性血小板增多症(ET)及35?57%的原发性骨髓纤维化(PMF)患者中。世界卫生组织已将JAK2-V617F突变作为MPN的诊断标准之一。因此,检测JAK2-V617F突变对患者的诊断、治疗具有重要的意义。
[0004]目前,国内针对JAK2-V617F突变的检测有常规DNA测序法和普通定性PCR法。常规DNA测序法是从全血粒细胞中抽提DNA,经PCR扩增后直接测序,然而,因为该突变是获得性的,且仅限于髓系,所以该检测方法的敏感性只有20?30%,检测灵敏度低,且试验程序繁琐、耗时长、成本高;普通定性PCR法是通过设计特殊引物,同时扩增内参和突变片段,然后通过普通电泳跑胶来观察检测结果,该方法的敏感性为
20?30%,检测灵敏度低,检测结果需要通过看电泳图,主观性强,容易出现假阳性或假阴性。
实用新型内容
[0005]为了解决上述技术问题,本实用新型的目的在于提供一种用于检测JAK2基因V617F位点突变的试剂盒,可以快速、准确地检测JAK2基因V617F位点突变。
[0006]为实现上述目的,本实用新型采取的技术方案是:一种用于检测JAK2基因V617F位点突变的试剂盒,包括盒体(I)、盒盖(2)和设置在盒体(I)内的衬垫(3),所述衬垫(3)上设有小孔,装有JAK2-Wild-F引物的试剂管(4)、装有JAK2-Mutation-F引物的试剂管(5)、装有JAK2-R引物的试剂管(6)、装有探针Probe的试剂管(7)、装有PCRMIX试剂的试剂管
(8)被设置在所述小孔内。
[0007]其中,所述试剂盒还包括:装有去离子水的试剂管(9)。[0008]其中,所述衬垫(3)上设有6个小孔,所述小孔在所述衬垫(3)上分成两排平行排列。
[0009]其中,所述引物浓度为5μmol/L,所述探针浓度为3μmol/L,所述探针两端分别标记荧光报告基团和荧光淬灭基团,所述引物和探针的序列如下:
[0010]
【权利要求】
,其特征在于:包括盒体(I)、盒盖(2)和设置在盒体(I)内的衬垫(3),所述衬垫(3)上设有小孔,装有JAK2-WiId-F弓I物的试剂管(4)、装有JAK2-Mutation-F引物的试剂管(5)、装有JAK2-R引物的试剂管(6)、装有探针Probe的试剂管(7)、装有PCRMIX试剂的试剂管(8)被设置在所述小孔内。
,其特征在于,所述试剂盒还包括:装有去离子水的试剂管(9)。
,其特征在于:其中,所述衬垫(3)上设有6个小孔,所述小孔在所述衬垫(3)上分成两排平行排列。