文档介绍：生化实验溶液的配制
***红(MR)试验/VP试验
.原理细菌分解培养基中的葡萄糖产酸,当产酸量大,使培养基
的pH降至4。5以下时,加入***红指示剂而变红E***(红色)~pH (黄色)),此为***红试验。当细菌发酵葡萄糖产生***酸,***酸再变为乙酰***甲醇;乙酰***甲醇又变成2,3—丁二烯醇,2,3—丁二烯醇在碱性条件下氧化成为二乙酰,二乙酰和蛋白胨中精氨酸胍基起作用产生粉红色的化合物,此为VP试验。这两个试验密切相关,对一种细菌而言,两者只能居其一
.培养基及试剂
葡萄糖蛋白胨水溶液。
***红试剂: ***,95%酒精60mL,蒸馏水40ral。
VP试剂: 甲液、:a—萘酚酒精溶液(o—萘酚5g,无水乙醇100mL)。乙液:KOH溶液(KOH40g,水l00mL)o将甲液和乙液分别装于棕色瓶中,于4~10C保存。或:硫酸铜1g,浓氨水40mL,10%KOH950mL,蒸馏水10mLo
MR试验方法取一种细菌的24h培养物,接种于葡萄糖蛋白胨水培养基中,置37C培养48~72h,取出后加***红试剂3~5滴,凡培养液呈红色者为阳性,以??十”表示;橙色者为可疑,以“±”表示;黄色者为阴性,以“―”表示。
VP试验方法取一种细菌的?24h纯培养物,接种于葡萄糖蛋白胨水培养基中,置
37'C培养48~,再加乙液 ,充分混匀。静置在试管架上,15min后培养液呈红色者为阳性,以“+”表示;不变色为阴性,以“—”表示。1h后可出现假阳性。或者可以用等量的硫酸铜试剂于培养液中混合,静置,强阳性者约5min后就可产生粉红色反应。
硫化氢试验
原理细菌分解含硫氨基酸,产生HS,与培养基中的醋酸铅或FeS04发生反应,形成黑色的硫化铅或硫化亚铁。
培养基可用成品微量发酵管、醋酸铅琼脂或三糖铁琼脂斜
面。
微量法取一种细菌纯培养物,接种于H2S微量发酵管中,置
37℃培养24h 后观察结果。培养液呈黑色者为阳性,以“+”
表示,无色者为阴性,以“—”表示。
常量法用接种针蘸取纯培养物,沿试管壁作穿刺醋酸铅琼脂
或三糖铁培养基,37℃培养24—48h或更长时间,培养基变黑者为阳性。或将纯培养物接种于肉汤,肝浸汤琼脂斜面或血清葡萄糖琼脂斜面,在试管壁和棉花塞间夹一
(浸有饱和醋酸铅溶液*),培养于37℃,观察纸条变黑者为阳性。
氧化型与发酵型(O/F)的测定
原理不同细菌对不同的糖分解能力及代谢产物不同,这种能力因是否有氧气的存在而异,有氧条件下称为氧化,无氧条件下称为发酵。这在区别微球菌与葡萄球菌、肠杆菌科成员中尤其有意义。
培养基蛋白胨2g,***化钠5g,,葡萄糖10g,琼脂3g,1%溴麝香草酚蓝3mL,蒸馏水1000mLo将蛋白胨、盐、琼脂和水混合,加热溶解,,然后加葡萄糖和指示剂,加热溶解;分装试管,3~4mL僧;115'C,高压蒸汽灭菌20min,取出后冷却成琼脂柱。
试验方法挑取18~24h的幼龄斜面培养物,穿刺接种,每种细菌接种两管,于其中l管覆盖lmL灭菌的液体石蜡,37C培养48h或更长时间,最长可达7d。
结果判定只在没有覆盖石蜡的一管发酵糖产酸或产酸产气者属氧化型;两管均发酵糖产酸或产酸产气者为发酵型;两管都不生长者不予判定结果。
糖类分解试验
原理细菌分解糖的能力与该菌是否含有分解某种糖的酶密切相关,是受遗传基因所决定的,是细菌的重要表型特征,有助于鉴定细菌,含糖培养基中加入指示剂,若细菌分解糖则产酸或产酸产气,使培养基颜色改变,从而判断细菌是否分解某种糖或其他碳水化合物。
培养基可用市售各种糖或醇类的微量发酵管。
试验方法取某一种细菌的24h纯培养物分别接种到葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇、蔗糖培养基内,开口朝下,置灭菌培养皿中。37C培养24h,观察结果并记录。如果接种进去的细菌可发酵某种糖或醇,则可产酸,使培养基由紫色变成黄色(培养基内指示剂溴甲酚紫由pH7,
0(紫色)一pH (黄色)),如果不发酵,则仍保持紫色。如发酵的同时又产生气体,则在微量发酵管顶部积有气泡。
无变化- 培养液仍为紫色
产酸. 培养液变为黄色
产酸又产气⊕培养液变黄,并有气泡
吲哚(靛基质)试验
原理有些细菌(如大肠杆菌)能分解蛋白质中的色氨酸产生吲哚,吲哚与对二
氨基苯甲醛作用,形成玫瑰吲哚而成红色。
培养基 Dunham氏蛋白胨水溶液。蛋白胨1g,***化钠0。5g,蒸馏水100mL。
将