紫外分光光度法测定维生素C和维生素E含量.doc

文档介绍：紫外分光光度法测定维生素C和维生素E含量
【摘要】本实验利用紫外分光光度法测定由维生素C和维生素E组成的混合物中各组分的浓度。在这两种组分组成的混合物中,彼此都不影响另一种物质的光吸收性质,根据相互间光谱的重叠的程度采用相对的方法进行定量测定。
【关键词】紫外分光光度法;维生素C;维生素E;浓度
1、引言
维生素C(抗坏血酸)和维生素E(α-生育酚)在食品中能起抗氧化剂作用,即它们在一定时间内防止油脂变性。两者结合在一起比单独使用的效果更佳,因为它们在抗氧化性能方面是“协同的”。因此,它们作为一种有用的组合试剂用于各种食品中。维生素C是水溶性的,维生素E是酯溶性的,它们都能溶于无水乙醇,因此能在同一溶液中,能够利用紫外可见分光光度法测定双组分相同的原理,在紫外光区测定它们。
2、实验原理
根据朗伯—比尔定律,用紫外—可见分光光度法很容易定量测定在此光谱区内有吸收的单一成分。由两种组分组成的混合物中,若彼此都不影响另一种物质的光吸收性质,可根据相互间光谱重叠的程度,采用相对的方法来进行定量测定。例如,当两组分吸收峰部分重叠时,选择适当的波长,仍可按测定单一组分的方法处理;但当两组分吸收峰大部分重叠时,则宜采用解联立方程组或双波长法等方法进行测定。
混合组分中在λ1处的吸收等于组分A和组分B分别在λ1处的吸光
度之和,即:
同理,混合组分在λ2处吸光度之和应为:
若先用A、B组分的标样,分别测的A、B两组分在和处的摩尔吸收系数、
、、
组:
;当测的未知试样在λ1和λ1处的吸光度和后,解下列二元一次方程
即可求得A、B两组分各自的浓度和。
一般来说,为了提高检测的灵敏度,λ1和λ2宜分别选择在A、B两组分最大吸收峰处或其附近。
、仪器试剂
仪器:紫外-可见分光光度计(天津港东UV-4501S),石英吸收池一对
试剂:维生素C(抗坏血酸),维生素E(α-生育酚),无水乙醇
、实验步骤
、检查仪器
开机预热20min,并调试至正常工作状态。
、配制系列标准溶液
(1)配制维生素C系列标准溶液:,溶于无水乙醇中,定量转移入1000 mL容量瓶中,用无水乙醇稀释至标线,摇匀。×mol/L。 mL, mL,
mL, mL于4只洁净干燥的50 mL容量瓶中,用无水乙醇稀释至标线,摇匀。
(2)配制维生素E系列标准溶液:,溶于无水乙醇中,定量转移入1000 mL容量瓶中,用无水乙醇稀释至标线,摇匀。×mol/L. mL, mL, mL, mL于4只洁净干燥的50mL容量瓶中,用无水乙醇稀释至标线,摇匀。
、绘制吸收光谱曲线
以无水乙醇为参比,在220~320 nm范围测定维生素C和维生素E的吸收光谱曲线,确定维生素C和维生素E的最大吸收波长
λ
、绘制标准曲线
(1)维生素C标准曲线:以无水乙醇为参比,分别在波长和处测定5个维生素C标准溶液的吸光度值。
(2)维生素E标准曲线:以无水乙醇为参比,分别在波长和