文档介绍：细胞遗传学实验
实验五细胞凝集反应(2学时验证性实验)
一、实验目的
1、观察血细胞的凝集现象;
2、掌握凝集素促使细胞凝集的原理。
二、实验原理
细胞质膜是由蛋白质不同程度镶嵌在脂双层中所形成的动态流动结构,蛋白质和脂类分子又与寡糖链结合为糖蛋白和糖脂分子,糖蛋白和糖脂分子伸至细胞表面的分枝状寡糖链在质膜表面形成细胞外被(又称为糖萼)。许多研究结果表明:细胞间的分子识别、细胞的生长和分化、免疫反应和肿瘤发生等均与细胞外被(分枝状寡糖链)有关。凝集素能与细胞外被的糖分子相连接、在细胞间形成“桥”,从而达到细胞凝集的效果。
凝集素(1ectin)是一类含糖的(少数凝集素例外)并能与糖进行专一性结合的蛋白质,它具有凝集细胞和刺激细胞分裂的作用。凝集素促使细胞凝集主要是由于它能与细胞外被的糖分子相连接、在细胞间形成“桥”的结果,且加入与凝集素互补的糖分子可以抑制细胞间的凝集反应。
三、实验材料及用品
? 实验材料:
。
%的红细胞:以无菌方法抽取兔子静脉血液(加抗凝剂),用生理盐水洗5次,每次2000 r/min,离心5 min,最后按沉淀压积的红细胞体积用生理盐水配成2%红细胞悬液
? 器材:显微镜、托盘天平、载玻片若干、滴管2支、离心管2支。? 试剂:PBS缓冲液:称取NaCl 、NazHP04 、KH2P04 、加蒸馏水,定容至l000 mL,。
四、实验步骤
①称取土豆去皮块茎2g
②加10 mL PBS缓冲液,浸泡2h(浸出的粗提液中含有可溶性土豆凝集素) ③载玻片上滴一滴土豆凝集素
④再滴一滴2%红细胞液,充分混匀
⑤静置20 min
⑥低倍显微镜下观察血球凝集现象
⑦以PBS液加2%血细胞悬液作为对照实验
五、实验作业
,表示血细胞的凝集过程;
。
实验六细胞膜的通透性观察(2学时验证性实验)
一、实验目的
。
。
二、实验原理
细胞膜是细胞与环境进行物质交换的选择通透性屏障。它是一种半透膜,可选择性控制物质进出细胞。各种物质出入细胞的方式是不同的,水是生物界最普遍的溶剂,水分子可以按照物质浓度梯度从渗透压低的一侧通过细胞膜向渗透压高的一侧扩散,这种现象就是渗透。渗透作用是细胞膜的主要功能之一。将红细胞放在低渗盐溶液中,水分子大量渗到细胞内,可使细胞胀破,血红蛋白释放到介质中,由不透明的红细胞悬液变为红色透明的血红蛋白溶液,这种现象称为溶血。将红细胞放在某些等渗盐溶液中,由于红细胞膜对各种溶质的通透性不同,膜两侧的渗透压平衡会发生改变,也会发生溶血现象。因此,发生溶血现象所需时间长短可作为测量物质进入红细胞速度的一种指标。本实验选用红细胞作为细胞膜透性的实验材料,将其放入不同的介质溶液中,观察红细胞的变化。
三、实验材料及用品
? 材料:鸡血细胞
? 器材:普通显微镜、普通离心机、扭力天平、10ml 试管、10ml 刻度离心管、试管架,2ml 注射器(无需针头)或5ml 移液管、洗耳球、滴管、载玻片、擦镜纸、记号笔等。
? 试剂:
溶