文档介绍：第三章 DNA物理图谱的构建及序列测定
物理图谱(physical map)
物理图/限制性图谱(restriction map)是各种限制性内切酶切点在某一DNA分子或DN***段上的排列,由于各酶切点之间的距离是以碱基对(kbp → mbp)表示的,所以可计算出二切点间的绝对距离,因此限制图也称物理图。物理图谱的构建是基因组研究的重要组成部分。
质粒pBR322的限制图
一、限制性核酸内切酶(restriction endonuclease)
细菌核酸内切酶
识别、剪切特殊双链DNA序列
用途:DNA物理图谱构建、DNA序列分析、基因分离、基因定位、DNA重组
20世纪50年代,Luria &Human、Bertani &Weigle:
噬菌体→细菌菌株1,正常生长。
→细菌菌株2,生长受到强烈抑制;少数存
活,再次感染菌株2,正常生长——受到
宿主的特意修饰。机制?
菌株
λ噬菌体感染率
K
B
C
K
1
10-4
10-4
B
10-4
1
10-4
C
1
1
1
1
1
1962,Arber:宿主的修饰在噬菌体DNA上进行
1965,Arber:宿主对入侵噬菌体的修饰与噬菌体DNA降解密切相关;预言细菌中存在位点特异性限制酶;修饰是宿主***化酶作用结果:建立细菌限制-修饰(R-M)系统概念。
Arber假说
细菌中存在具有相同位点特异性的 2种酶:限制性内切核酸酶;***化酶
细菌的限制-修饰系统是抵御外来侵袭的一种重要措施
1978年诺贝尔生理学或医学奖
限制性核酸内切酶的发现
1968年,Linn & Arber于大肠杆菌B中发现第一种限制性内切核酸酶(I型:识别特异剪切随机)。
1968年,Meselson & Yuan从大肠杆菌K中获得高纯度限制性内切核酸酶(I型)。
1970年,Smith从流感嗜血杆菌Rd中分离出第一种II型限制性内切核酸酶——Hind II。
流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae)能迅速降解外源的噬菌体 DNA ,其细胞提取液可降解 DNA ,但不能降解自身 DNA ,→ HindⅡ限制性内切酶。 HindⅡ限制性内切酶位点和切割位点如下:             5 '… GTPy ↓ PuAC … 3 '             3 '… CAPu ↑ PyTG … 5 '