文档介绍：浙江大学
博士学位论文
假单胞菌菌株HF-1的尼古丁代谢途径及其分子生物学研究
姓名:邵铁娟
申请学位级别:博士
专业:微生物学
指导教师:闵航
20070501
摘要强烈的抑制作用,且浓度越大。抑制作用越强,呈现出显著的浓度擞应关系。尼古丁对兰统地研究了菌株降解尼古丁的代谢途径及降解功能酶,为建立有效的尼古丁污染预警指标体系及该降解菌在尼古丁污染生物修复中的应用提供了理论依据和参考基础。本研究所⒖莶菅挎吒司微生物纯培养的生理毒性,获得如下初步结论:在实验浓度范围内,不同浓度尼古丁对对数‘际咕甑腁比活力下降。、红霉素及先锋霉素等抗生素具有抗性。,综合运用传统及现代分子生物学手段,全面探讨了尼古丁对典型土壤微生物的氧化应激效应,筛选获得缺失尼古丁降解功能的突变菌株,并较为系获得的主要结果如下:ü酝寥赖湫微生物和尼吉丁降解菌的生长、活性、应激反应以及生化指标方面的影响,、蒊富钚缘挠跋炀哂邢灾钜欤煌ǘ饶峁哦对稳定生长期菌体的虲活性影响较小,且一般表现为抑制作用。D峁丁刺激对数生长期—闍先活力增加,,但对尼古丁降解菌株的诱导作用弱于其他址悄峁哦〗到饩辍=⑸锾迥赟、虯富钚宰魑;肪呈到尼吉丁污染胁迫的分子指标具有一定可行往。』竦胠株缺失尼古丁降解功能的突变菌株。突变菌株与出发菌株在菌落形态及菌体形状上都极为相似,鼍甑靖的序列同源性达到ィ旧峡梢匀范ň6癯艏俚グ?股孛舾行允匝楸砻髂峁哦〗到饩闒及突变菌株对丁***卡那霉索、头孢菌素,硫酸庆大霉素等抗生索敏感,而对***霉索、氨苄青霉素、青霉素钠、失尼古丁降解功能的突变菌株中提取到大小为左右的质粒,初步表明这个质粒可甃
利用蚅检测菌株的尼古丁代谢中间产物发现,假单胞菌代宁、麦斯明等物质外,且没有发现其他假单胞菌株的尼古丁代谢产物谆笏垢拢的个蛋白分为氨基酸合成、能量代谢、蛋白折叠、脱毒和热激蛋白、尼古丁代谢相关及能与尼吉丁降解无关。峁哦〉奈⑸,对数生长期菌体的生长与尼吉丁降解之间存在显著的相关性。同时。培养基诰晟ず湍峁哦〗到夤讨谢颈3趾愣ā>闔在应用微生物技术处理烟草废弃物方面具有较强的潜力。谢尼古丁的途径与己知的假单胞菌尼古丁代谢途径存在明显差异,而与尼古丁在哺乳动物中的代谢过程比较相似。除检测到其他假单胞菌中未曾报到的尼古提林、脱***尼吉丁、可铁形成一种从未报道过的、浚绿色的代谢产物。〈徊铮掷敕灞A时间分别为.,.....:个样品在负离子模式下进行分析,测得治镏实姆肿恿糠直鹞、/,。这帜峒6〈〉耐揪队爰褐<俚グ⒌哪峁哦〈途径相似。。盟虻缬炯吧镏势准际跹芯苛四峁哦∮盏继跫戮闔牡白灾时泶锿谱,并对尼古丁诱导的特异性蛋白进行了鉴定。研究表明,菌株在尼古丁胁迫条件下新诱导合成个特异性蛋白。实验切取个特异性蛋白质点,利用甌佃和甅辛说鞍字实募ā8莸鞍字誓骋环矫娴闹饕9δ埽梢越峁哦∮盏枷其他功能蛋白等罄啵菌株诱导表达了一系列氨基酸合成相关蛋白等铣上喙氐鞍、解毒蛋白及运输蛋白等蛋白来应激尼古丁的胁迫,减少尼古丁对菌体细胞的伤害。尼古丁胁迫条件下菌株诱导表达了一种内酰***〈恍纬一琥珀酰毗啶后菌株沿着已知假单胞菌摘要甅蓿甋,
尼古丁降解途径进一步代谢,经过琥珀酸、腔ぃ砝此岬任镏噬筛宦硭岷蠼关键词:尼古丁;假单胞菌;氧化应激;突变;生物降解:代谢途径;双向电泳『;入三羧酸循环。此外,;降解酶■强
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