文档介绍：组织DNA的提取与纯化
检验系生化教研室陈宁
讲课内容
概述
1
试验原则
2
实验操作及相关试剂介绍
3
注意事项
4
一、概述
DNA在生物组织中以核蛋白的形式存在于细胞核中。
单倍体人类DNA平均相对分子量为6×1010 道尔顿,×105kb。
DNA的分类有:
真核DNA
细菌DNA
病毒DNA
质粒DNA
DNA样品的来源:
组织–肝脏、赘生物、肌肉、培养细胞
血液
细菌–培养细菌、质粒
二、实验原则
保证DNA一级结构的完整性
排出其他干扰性分子的污染
干扰分子
对酶有抑制作用的物质
样品中存在的其他生物大分子
有机溶剂、高浓度的金属离子等
蛋白质、多糖和脂类
应尽量将此类物质的浓度降低到最小程度
相应抽提对象之外的核酸污染
DNA抽提时,应避免RNA干扰
相关因素对于核酸的影响:
机械剪切力、高温剧热环境
过酸、过碱的反应体系
各种核酸酶降解效应
物理因素
化学因素
生物因素
操作轻柔,切忌剧烈混匀、震荡;控制实验温度
pH 4~10
EDTA缓冲液
避免干扰因素的解决方法
简化操作步骤,缩短提取过程,减少各类因素对核酸的降解。
三、实验操作及相关试剂介绍
【实验方法】
物理方式:玻璃珠法
超声波法
研磨法
冻融法
化学方式:异硫氰酸胍法
酚-氯仿抽提法
碱裂解法
生物方式:酶法