文档介绍：南京师范大学
硕士学位论文
类风湿关节炎患者关节成纤维样滑膜细胞蛋白质组的研究
姓名:赵晓琴
申请学位级别:硕士
专业:微生物学
指导教师:李晓军
20100519
摘要类风湿关节炎琑是一种以慢性关节滑膜炎为主要特点的自身免疫性疾病,目前认为抗原驱动及赴榈际荝⒉〉墓丶蛩兀泄仄确切发病机制仍未完全明确,因而尚无满意的诊断方法和治疗药物。近年来蛋白质组学技术的飞速发展,为研究的发病机制和发现早期诊断的分子标记物提供了科学依据。,.治鯮颊哂胪饪拼瓷嘶颊吖亟诔上宋膜细胞現鞍字时泶锊钜欤Q罢襌噝亟诨ぬ异性表达蛋白、的早期诊断、药物靶点筛选及发病机制探讨提供可靠的实验研究依据。由于健康人滑膜组织难以获取,本实验中采用外科创伤患者作为对照组。取自经手术切除的患者和外科创伤患者的滑膜组织,采用胶原酶和胰酶结合消化法分离培养庖呦赴Ъ‵内波形蛋白的表达。选用呀庀赴竦孟赴艿鞍祝珺舛ǖ鞍字逝ǘ龋掷隦者及对照组艿鞍字剩壕鞠陨ê虸图像软件分析凝胶图谱,从凝胶中切取差异蛋白质斑点,,,用查询软件搜索数据库鉴定蛋白,初步分析某些蛋白质在械墓δ埽⒍圆糠植钜斓鞍字实憬蠾验证。光学显微镜下可见,培养的仕笮位蛑危郊ò幌赋ぃ┒硕嘤肓诮细胞连接并交织成网状,呈现极向排列或涡旋生长。细胞核呈卵圆形,位于细胞中央,核仁明显。免疫细胞化学染色结果显示诔蕍粜苑从Γ粜韵赴率达%以上,符合成纤维细胞的特征。患者和对照组计追直鹣允境龅鞍字实恪6远相互匹配的蛋白质点进行差异分析,以差异量大于兜谋泶锪课W迹醪缴秆〕个差异表达的蛋白质斑点,其中中表达上调和高丰度表达的蛋白有个,下调表达的个。,成功鉴定出个点,⒑讼瞬愕鞍瓵/琇、过氧化物还原酶,、谷胱甘肽转移酶珿⒌鞍字识蚧镆旃姑窤疤珽燃河形南妆ǖ涝赗谐氏痔匾煨员泶铮摘要/.畆甶
其中荝阎5淖陨砜乖碛鍪潜狙芯啃路⑾值木哂星痹谟τ眉壑档分子标记物。根据数据库提供的信息,对鉴定的蛋白质按功能进行初步分类,主要涉及:①参与物质代谢或能量产生的生物酶类,如肿瘤型***酸激酶畃,.【.虎谙赴藕抛5嫉鞍祝缒ち5白,;③细胞结构蛋白,如瓵/;④分子伴侣,如葡萄糖调节蛋白珿琣宓琀虎菁俣ɑ蛭粗5鞍祝鏟,。为进一步证实差异蛋白在中的特异表达,我们选择霾钜斓鞍捉觯甧、狝/、.,运用技术对及对照组猩鲜龅鞍点的表达水平进行检测,证实这些差异蛋白均在谐噬仙泶锘蛱匾毂泶铮从而验证了结果的准确性。以上研究结果提示,患者与对照组浯嬖诓钜毂泶锏牡鞍字剩砻鱎的发生是一个多种蛋白质分子参与的复杂过程。这些差异蛋白有可能构成关节滑膜的相关自身抗原,在诱导自身免疫反应中发挥一定作用。关键词:类风湿关节炎;成纤维样滑膜细胞;蛋白质组,二维电泳,质谱分析白甤摘要琺Ⅱ
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多种自身抗原,如Ⅱ型胶原、人类软骨糖蛋白第一章绪论弟一早珀下匕翁庋芯勘尘类风湿关节炎琑是一种常见的以关节组织炎症病变为主的全身性、系统性自身免疫性疾病,对人体健康危害极大,”溆星嵊兄兀虏新式细撸严重的甚至会影响患者的寿命,因而受到各国科学家的重视。病理特征为滑膜组织的炎性增生,内膜增厚,多种炎性细胞浸润、血管翳形成以及软骨和骨组织的破坏,最终导致关节畸形和功能丧失。该病呈持续性、反复发作过程】。目前认为,可能是由于某种未知抗原对具有敏感性的某些遗传背景的人产生刺激后,发生免疫反应所引起,通常认为与赴庖叻从虰细胞产生自身抗体均有关,但其具体发病机制尚不清楚。现在虽已发现在患者血清存在一】和磷酸葡萄糖异构酶一珿有证据表明这些抗原是真正的靶抗原并参与了发病。的主要病变在关节,在关节内可以看到滑膜组织异常增厚、多种炎性细胞浸润以及软骨与近关节处骨组织的破坏。研究认为,虽然滑膜内大量炎性细胞集聚,但真正导致滑膜增生的原因是成纤维样滑膜细胞猯,的过度增殖。唤龃罅吭錾狗置诖罅肯赴蜃尤绨捉樗匾..、白介素.,一、前列腺素,⒒式鹗蛋白酶琈和组织蛋白酶等效应分子,对骨与软骨组织造成侵蚀,蝗衔J墙榈糝亟谄苹档闹饕Pвο赴T嚼丛蕉嗟闹ぞ表明,活化的诨ぱ字⒑筒∏榉⒄怪蟹⒒恿酥匾5淖饔谩】。细胞的生命活动是受到严格调控的,其中任何一个环节失控,都会导致疾病的发生。氏殖霰硇透谋浜偷蛲霾蛔悖馐怯捎诙喔龌蚍⑸谋涞慕峁А基因突变、基因转录中的任何差错,都会导致蛋白质的变化。那么这些变化的基因或蛋白在疾病的发生发展中起到什么作用酝