第七章 酶联免疫吸附分析PPT课件.ppt

文档介绍：判断题(8题,每题1分)
填空题(23题,每题1分)
名词解释(5题,每题3分)
简答(6题,每题7分)
实验设计(1题,每题12分)
第七章酶联免疫吸附分析
抗原:抗原是指进入人或动物机体后,可刺激机体免疫系统发生免疫应答,从而引起动物产生抗体或形成致敏淋巴细胞,并能和抗体或致敏淋巴细胞发生特异性反应的物质。
抗体:是由抗原刺激动物的免疫系统后,由免疫系统产生分泌的能和相应抗原发生特异性结合的免疫球蛋白。
抗原抗体的基本特性:a、反应的特异性;b、反应的等比例性
抗原-抗体识别反应示意图
它采用抗原与抗体的特异反应将待测物与酶连接,然后通过酶与底物产生颜色反应,用于定量测定。测定的对象可以是抗体也可以是抗原。
在这种测定方法中有3种必要的试剂:
①固相的抗原或抗体(免疫吸附剂)
②酶标记的抗原或抗体(标记物)
③酶作用的底物(显色剂)
一、ELISA原理
测量时,抗原(抗体)先结合在固相载体上,但仍保留其免疫活性,然后加一种抗体(抗原)与酶结合成的偶联物(标记物),此偶联物仍保留其原免疫活性与酶活性,当偶联物与固相载体上的抗原(抗体)反应结合后,
再加上酶的相应底物,即起催化水解或氧化还原反应而呈颜色。
ELISA原理
酶
底物
显色反应
测定波长
辣根过氧化物酶
邻苯二***四甲替联苯***氨基水杨酸邻联苯甲***2,2‘-连***基-2(3-乙基-并噻唑啉磺酸-6)铵盐
橘红色黄色棕色兰色蓝绿色
492
460
449425642
碱性磷酸酯酶
4-硝基酚磷酸盐(PNP)萘酚-AS-Mx磷酸盐+重氮盐
黄色红色
400500
葡萄糖氧化酶
ABTS+HRP+葡萄糖葡萄糖+甲硫酚嗪+噻唑兰
黄色深蓝色
405
420
β-D-半乳糖苷酶
***伞***基半乳糖苷(4MuG)硝基酚半乳糖苷(ONPG)
荧光黄色
360,450420
ELISA的种类和变化
(一)双抗体夹心法
(二)间接法
(三)竞争法
(四)双位点一步法
(五)捕获法测IgM抗体
(六)应用亲和素和生物素的ELISA