文档介绍：蛋白质的变性、凝固及沉淀
实验一
生物化学与分子生物学教研室
实验目的
能够说出蛋白质变性、凝固反应的原理及实验方法
能够说出蛋白质沉淀反应的原理及实验方法
能够运用盐析法及重金属沉淀法
主要实验内容
蛋白质的加热变性凝固
蛋白质沉淀反应
蛋白质盐析
重金属盐沉淀蛋白质
生物碱试剂沉淀蛋白质
蛋白质的变性(denaturation)
在某些理化因素的作用下,蛋白质严格的空间结构被破坏(不包括肽键的断裂),从而引起若干理化性质和生物学性质改变的现象。
变性后的蛋白质称变性蛋白,能使蛋白质变性的物质叫蛋白质变性剂。
变性因素
物理因素
高温、高压
紫外线、X射线、
电离辐射和超声波等
化学因素
强酸、强碱
有机溶剂、重金属盐
高浓度尿素、盐酸胍等
变性实质:
破坏了空间结构,一级结构不受影响(分子组成、
分子量不变)。
变性的可逆性
可逆变性:除去变性因素,蛋白质空间结构可以恢复原状。
不可逆变性:除去变性因素,蛋白质空间结构不能恢复原状。
利用
消灭病原微生物
蛋白质制剂的保存
保护体内蛋白质
避免
蛋白质分子颗粒大小1-100nm之间,属胶体颗粒范围,在溶液中能形成稳定的胶体。
原因
蛋白质的胶体性质及沉淀:
表面形成水化层
表面同种电荷的斥力
除去这两个因素,就会发生沉淀。蛋白质分子相互聚集而从溶液中析出的现象称为沉淀。
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可逆沉淀
不可逆沉淀
结构和性质都不变
适当条件下可重新溶解
是分离和纯化的基本方法
结构和性质都发生变化
沉淀不再溶解于水
蛋白质的沉淀
蛋白质变性沉淀并凝聚成块状称为凝固。
不可逆变性状态
蛋白质的凝固