文档介绍：酶联免疫吸附试验(ELISA)测定方法
ELISA概述
ELISA基本原理
ELISA试剂的组成
ELISA测定方法
ELISA实验过程
ELISA在食品检测中的应用
ELISA在国外研究进展
ELISA概述
enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA
ELISA属于标记免疫学技术的一种,1971年由荷兰和瑞典的学者提出,由于其操作过程简单易行并可以定量,从而使其在食品安全和卫生检测中得到了广泛的应用。目前市场上有多种基于ELISA方法开发的用于食品中抗生素检测的试剂盒产品。
酶联免疫吸附试验测定法和其他免疫方法一样,都是以抗体和抗原的特异性结合为基础,其差别在于酶联免疫方法以酶或者辅酶作为标记物来标记抗原或抗体,用酶促反应的放大作用来显示初级免疫学反应。
其最大的特点是利用聚苯乙烯微量反应板(或球)吸附抗原或者抗体使之固相化,在其中进行免疫反应和酶促反应。
ELISA基本原理
使抗原或抗体结合到某种固相载体表面,并保持其免疫活性(固相抗原/抗体的形成)
在测定时,把受检标本(测定其中的抗体或抗原)和酶标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应(抗原抗体反应)
ELISA基本原理图示
洗涤的方法将固相载体上的复合物与其他物质分离
将抗原或抗体固定于合适的载体上,并保持其生物活性
使抗原或抗体与某种酶连接,形成酶标抗原或抗体
加入酶反应底物,复合物上的酶催化底物使其分解,氧化或还原成有色产物
待测样品与酶标抗原或抗体反应
ELISA试剂组成
完整的ELISA试剂盒应包含以下各组分: (1)已包被抗原或抗体的固相载体(免疫吸附剂,俗称酶标板) (2)酶标记的抗原或抗体(酶标记物)(3)酶的底物
(4)系列参考标准品(定量测定) (5)酶标记物及样本的稀释液 (6)洗涤液 (7)反应终止液
固相载体在ELISA测定过程中作为吸附剂和容器,不参与化学反应。可作ELISA中载体的材料很多,最常用的是聚苯乙烯。ELISA载体的形状主要有三种:微量滴定板、小珠和小试管。以微量滴定板最为常用,专用于EILSA的产品称为ELISA板,国际上标准的微量滴定板为8×12的96孔式。
2. 免疫吸附剂
已包被抗原或抗体的固相载体,是ELISA方法中的核心试剂。