文档介绍：血清葡萄糖浓度测定
实验目的
1. 掌握血清葡萄糖浓度测定方法(GOD-POD法)。
2. 了解口服葡萄糖耐量试验(OGTT)的测定方法与临床意义。
血糖测定方法
实验原理
(一)无机化学法:Folin-Wu法基于葡萄糖醛基的还原性
(二)有机化学法:邻甲苯胺法、联苯胺法等
Cu2+
OH-
Cu+
Glu
磷钼酸
显色
葡萄糖在酸性条件下加热可脱水生成5-羟甲基-2-呋喃甲醛,后者与邻甲苯胺缩合成青色的Schiff碱。Schiff碱的颜色深浅与样品中葡萄糖的含量成正比。
评价:操作简便,特异性较高。
Schiff碱(青色)
单酶反应法:A B
直接测定底物的含量,由酶的变化量来测定底物量
酶偶联反应法:A B C
常以脱氢酶或者过氧化物酶作指示酶
1. 己糖激酶法(Hexokinase, HK)
葡萄糖+ ATP 葡萄糖-6-磷酸+ ADP 葡萄糖-6-磷酸+ NADP+ 6-磷酸葡萄糖酸内酯+ NADPH
HK
葡萄糖-6-磷酸脱氢酶
NADPH在340 nm有吸收峰,其吸光度增加与标本中的葡萄糖浓度成正比。本法特异性高,灵敏度高,干扰因素少,为葡萄糖测定参考方法,但试剂较贵。
(三)酶法
葡萄糖氧化酶GOD (glucose oxidase) 将葡萄糖氧化为葡萄糖酸,并释放过氧化氢。过氧化物酶POD (peroxidase)将过氧化氢分解为水和氧,并将无色的4-氨基安替比林与酚氧化缩合生成红色的醌类化合物(Trinder反应),其红色深浅在一定范围内与葡萄糖浓度成正比。
2. 葡萄糖氧化酶法(GOD-POD法)
妊娠糖尿病GDM (Gestational diabetes mellitus)
一般在妊娠后期(孕期的第28周左右)发生,占妊娠妇女的2-3%。发病与妊娠期进食过多以及胎盘分泌的激素抵抗胰岛素的作用有关。大部分病人分娩后可恢复正常。
口服葡萄糖耐量试验OGTT (Oral glucose tolerance test)
OGTT为口服葡萄糖负荷试验,可了解人体进食葡萄糖后的血糖调节能力,早期发现糖代谢异常,早期诊断糖尿病,是一种简单、快捷的诊断方法。
OGTT重复性差,操作繁琐,并非必需的糖尿病诊断方法,因此不推荐临床常规应用。
人体对糖的耐受现象
方法:试验前三天,受试者每日食物中糖含量不应低于150 g,且维持正常活动。影响试验的药物应在三天前停用,受试前应空腹10-16 h。空腹取血后,5分钟内饮入250 mL含75 g无水葡萄糖的糖水(妊娠妇女用量为100 g, g/kg体重给予,不超过75 g)。服糖后半小时、l小时、2小时、3小时各抽血一次,定量测定血糖。采血同时每隔1小时取尿液作尿糖试验。整个过程不可吸烟、喝咖啡、喝茶或进食。
糖耐量正常: 空腹血糖≤ mmol/L;
服糖30-60 min达峰值,但一般<10 mmol/L
服糖2h后恢复至空腹血糖水平, 即< mmol/L
尿糖(-)
mmol/L